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上海博湖生物科技有限公司
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一種追蹤蛋白質(zhì)的傳統(tǒng)方法
2020-2-25 閱讀(2036)
實(shí)驗(yàn)涉及在短時(shí)間內(nèi)用放射性前體標(biāo)記細(xì)胞(脈沖，通常是在培養(yǎng)基中添加放射性的和/或半)，然后在蛋白質(zhì)動力學(xué)過程中，在培養(yǎng)基中添加未標(biāo)記的前體，細(xì)胞被允許恢復(fù)。隨著帶有標(biāo)記前體的舊蛋白在細(xì)胞內(nèi)被降解，使用未標(biāo)記前體的新蛋白同時(shí)被合成。
這是一種追蹤蛋白質(zhì)并估計(jì)其穩(wěn)定性的傳統(tǒng)方法，除了涉及到處理放射性，這種方法在測量蛋白質(zhì)半衰期時(shí)比其他藥理方法具有明顯的優(yōu)勢，在實(shí)驗(yàn)室中仍然經(jīng)常使用。它不僅能測量蛋白質(zhì)半衰期，而且如果你擅長放射自顯影和亞細(xì)胞分離，還可以追蹤蛋白質(zhì)并確定其亞細(xì)胞定位。
在不同的時(shí)間點(diǎn)免疫沉淀蛋白質(zhì)，用放射自顯影法測量樣品中的放射性。根據(jù)非放射性蛋白質(zhì)取代放射性蛋白質(zhì)的速度，可以確定任何蛋白質(zhì)的半衰期。這種方法的另一種非放射性變異是zui近流行的bleach-chase(漂白追蹤)，具體方法是目的蛋白與熒光團(tuán)融合，進(jìn)而通過短暫的光脈沖來漂白，漂白促使標(biāo)記蛋白分為了兩種亞群：熒光蛋白和非熒光蛋白，漂白后熒光恢復(fù)率與降解速率相關(guān)。
