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上海博湖生物科技有限公司
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小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3elisa試劑盒操作方法和結(jié)果計(jì)算與判斷
2018-12-11 閱讀(177)
| 提 供 商 | 上海博湖生物科技有限公司 | 資料大小 | 15.5KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 177次 |
小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3elisa試劑盒 操作方法
1. 實(shí)驗(yàn)前 20 分鐘從冰箱中取出試劑盒，以平衡至室溫（20-25℃）；
2. 取出所需數(shù)量的板條，其余密封放回 4℃；
3. 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔 8 孔，每孔中各加入樣品稀釋液 100ul，孔加標(biāo)準(zhǔn)品 100nl，混勻后用加樣器吸出 100ul，移至第二孔。如此反復(fù)對倍稀釋至第七孔，后，從第七孔中吸出 100ul 棄去，使之體積均為 100ul。第八孔為空白對照；
4. 加樣：待測品孔中每孔加入待測樣品 100ul；
5. 將反應(yīng)板置 37℃120 分鐘；
6. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干;
7. 每孔中加入抗體工作液 50ul;
8. 將反應(yīng)板充分混勻后置 37℃60 分鐘。
9. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干;
10. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液 100uL. 11. 將反應(yīng)板置 37℃60 分鐘。
12. 洗板：同前。
13. 每孔加入底物液 100uL，置 37℃暗處反應(yīng) 5-10 分鐘。
14. 每孔加入 50uL 終止液混勻。
15. 在 450nm 處測吸光值。（應(yīng)盡快，時(shí)間過長可能導(dǎo)致本底偏高）
結(jié)果計(jì)算與判斷：
1.所有 OD 值都應(yīng)減除空白值后再計(jì)算；
2.以標(biāo)準(zhǔn)品 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.62、0pg/ml 之 OD 值在半對數(shù)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線，將濃度作為 X 軸（對數(shù)軸），OD 值作為 Y 軸（線性軸）。曲線應(yīng)為一光滑曲線。
3.根據(jù)樣品 OD 值在該曲線圖上查出相應(yīng)IGFBP7含量。
