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山東風途物聯(lián)網(wǎng)科技有限公司
主營產(chǎn)品： 農(nóng)田小氣候觀測系統(tǒng),農(nóng)業(yè)氣象觀測儀器,校園教學氣象站 |
| 參考價 | ￥ 2500 |
| 訂貨量 | 1臺 |
- 型號 FT-ZWSJ
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
- 所在地 濰坊市
聯(lián)系方式：杜俊卿查看聯(lián)系方式
更新時間：2021-03-03 16:01:02瀏覽次數(shù)：2107
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非洲豬瘟檢測卡【獸藥名稱】
通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR快速檢測試劑盒
商品名稱：無
漢語拼音：Feizhouzhuwenbingdu Yingguang PCR Kuaisu Jiance Shijihe
英文名稱：Real-time PCR for Rapid Detection of African Swine Fever Virus
【主要成分與含量】
序號 | 成分 | 含量 |
1 | PCR反應液 | 1管（1ml/管） |
2 | Solution A | 1管（5.5ml/管） |
3 | Solution B | 1管（5.5ml/管） |
4 | 陰性對照 | 1管（0.5ml/管） |
5 | 陽性對照 | 1管（0.25ml/管） |
6 | 說明書 | 1份 |
【作用與用途】本試劑盒適用于豬血液、豬肉組織、淋巴結、脾臟等樣本中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。
非洲豬瘟檢測卡【用法與判定】
1用法
1.1樣品處理及模板準備
1.1.1樣品處理
·組織樣品處理：分別從豬肉組織、淋巴結、脾臟不同位置取樣，用手術剪剪碎混勻后取0.1g于研磨器中研磨，加入1.5ml生理鹽水繼續(xù)研磨，待勻漿后轉至1.5ml無菌離心管，12000 r/min離心2分鐘，取上清200μl備用。
·血液樣品無需處理，取200μl備用。
1.1.2模板準備
·根據(jù)不同的樣本類型，按照下表準備相應的樣本用量。
·將樣本加入到1.5 ml離心管中，加入下表體積的Solution A，渦旋震蕩20 s，并按照下表的處理方法，室溫靜置3-5 min，或95℃金屬浴振蕩孵育3-5 min。
·樣本充分裂解后（95℃金屬浴振蕩孵育的樣本需恢復室溫），加入下表體積的Solution B，并渦旋震蕩30 s，12000rpm離心2min，上清即為模板DNA。
·處理后的樣本如在2小時內(nèi)進行下一步試驗，請于4℃保存，如不能立即進行下一步試驗，請于-20℃保存。
樣本類型 | 樣本用量 | Solution A | 處理溫度及時間 | Solution B |
全血 | 10μl | 100μl | 室溫靜置3-5min | 100μl |
唾液 | 100ul | 100ul | 室溫靜置3-5min | 100μl |
口腔拭子 | 1個 | 400μl | 95℃，3-5min | 400μl |
組織勻漿 | 10μl | 100μl | 室溫靜置3-5min | 100μl |
備注：組織樣本加入10倍體積的生理鹽水制成組織勻漿液后，可按照血液樣本的處理方法進行處理。
1.1.3可利用商品化試劑盒提取核酸進行反應，效果更佳
1.2熒光PCR擴增
1.2.1試劑準備
實驗前20分鐘將試劑從冰箱取出并恢復至室溫，使其*融化，充分混勻后瞬時離心去除管壁吸附液體。
1.2.2配制反應體系
按下表1體系，在配套PCR管中配制反應體系，蓋緊管蓋后瞬時離心10秒，轉移至擴增區(qū)。
表1 PCR反應體系
成分 | 體積 |
PCR反應液 | 18μl |
預準備的模板（樣本/對照） | 2μl |
總體積 | 20μl |
1.2.3 PCR擴增
快速模式
表2儀器PCR擴增參數(shù)
階段 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
1 | 95℃ | 30s | 1 |
2 | 95℃ | 10 s | 40 |
60℃ | 20 s（采集熒光信號） | ||
FAM通道采集熒光信號，需要內(nèi)參的話請同時打開HEX/VIC熒光通道 | |||
2判定
2.1合理調(diào)整閾值線，不同儀器可根據(jù)儀器噪音情況進行調(diào)整。
2.2試劑盒有效性判定
·陰性對照：無Ct值，線形為直線或微斜，無明顯指數(shù)增長。
·陽性對照：Ct值≤30，有明顯指數(shù)增長，呈典型的S型曲線。
2.3樣本結果判定
·樣本檢測結果Ct值≤38，有明顯指數(shù)增長，判定為陽性，表明樣本中檢測出非洲豬瘟病毒。
·樣本檢測結果38＜Ct≤40，判定為可疑。應對樣本進行復測，若復測結果Ct值仍在38~40之間，有明顯指數(shù)增長，則判定為陽性，否則為陰性。
·樣本檢測結果無Ct值，判定為陰性，表明樣本中未檢測出非洲豬瘟病毒。
【注意事項】
（1）實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書，嚴格按步驟執(zhí)行，不使用本試劑盒提供的組份或不按照說明書進行實驗可能導致錯誤結果。
（2）所有試劑應在規(guī)定溫度儲存。-20℃保存的試劑在使用前應充分混勻。試劑盒反復凍融次數(shù)不宜超過5次。
（3）實驗操作應按照國家有關臨床基因擴增實驗室管理規(guī)范執(zhí)行，實驗過程應分區(qū)（試劑準備區(qū)、樣本制備區(qū)、核酸擴增區(qū)），各區(qū)物品為，不得交叉使用，避免污染。
（4）操作臺、移液器、離心機等儀器用品應經(jīng)常用1%次氯酸鈉、75%乙醇或紫外燈進行消毒。耗材應進行無酶處理。
（5）待檢樣本、試劑盒組份及實驗中的廢棄物需按照具有潛在傳染性物質(zhì)處理方法進行處理。
（6）為防止熒光干擾，應避免使用含熒光物質(zhì)的手套，避免用手直接接觸，預防交叉污染。
（7）檢測結果為陰性，并不*代表為非感染狀態(tài)，具體診斷需結合獸醫(yī)臨床。
（8）產(chǎn)生假陰性的可能原因為：待檢樣本在采集、運輸、保存及核酸提取過程中操作不當造成DNA降解；樣本中核酸濃度低于min檢測限；病毒待測靶基因出現(xiàn)變異；未經(jīng)驗證的其他干擾因素。
（9）產(chǎn)生假陽性的可能原因為：待檢樣本采集、運輸及核酸提取過程中發(fā)生交叉污染。
【規(guī)格】50反應/盒
【貯藏及有效期】試劑盒-20℃以下冷凍避光保存，有效期為12個月。
