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產(chǎn)品及特點(diǎn) 蜂房小甲蟲(chóng)（Aethina tumida）是蜂群的寄生蟲(chóng)。它的成蟲(chóng)和幼蟲(chóng)以蜂子、

蜂蜜和蜂花粉為食,導(dǎo)致幼蜂死亡、蜂蜜發(fā)酵及巢脾被破壞。小甲蟲(chóng)加速破壞蜂

巢,使成年蜜蜂逃逸。其損害程度可能取決于氣候條件等因素,相比溫度和濕度較

低的地區(qū),蜂房小甲蟲(chóng)在較高的溫度和高濕度下的危害一般更大。蜂蜜提純?cè)O(shè)備

也是蜂房小甲蟲(chóng)潛在的繁殖場(chǎng)所,一旦蜂房小甲蟲(chóng)出現(xiàn)在這種設(shè)備中,這種危害

會(huì)更嚴(yán)重。從卵發(fā)育到成蟲(chóng),蜂房小甲蟲(chóng)需要 3~12 周,周期長(zhǎng)短取決于濕度、溫

度和食物供應(yīng)。成蟲(chóng)飛行時(shí)所到之處,所有規(guī)模的蜂群都會(huì)被侵?jǐn)_，因此蜂房小

甲蟲(chóng)的快速檢測(cè)具有重要的意義。本試劑盒根據(jù) PCR 原理開(kāi)發(fā)，它具有下列特

點(diǎn)：

1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供細(xì)菌 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，專(zhuān)一性強(qiáng)，只擴(kuò)增蜂房小甲蟲(chóng)。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分 成 份 編號(hào) 十孔盒包裝

PCR MagicMix 3.0 90805 1 mL（紅蓋）

超純水 100935 1 mL（亮黃蓋）

蜂房小甲蟲(chóng) PCR 引物混合液 13-68100yw 100 μL（白蓋）

蜂房小甲蟲(chóng) PCR 陽(yáng)性對(duì)照

（1×10E8 拷貝/μL） 13-68100pc 50 μL（黃蓋）

天凈沙核酸釋放劑試用裝 61202 20 次（1mL，綠蓋）

使用手冊(cè) 13-68100sc 1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其

他試劑。

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)

性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用10μL 陽(yáng)性對(duì)照的10000

倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作

為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)寄生蟲(chóng) DNA 提取試劑盒兼容。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 20 次免 DNA 提取的天凈沙核酸釋放劑，

本產(chǎn)品的裂解液可以直接作為 PCR 模板，省略了 DNA 提取步驟。放劑或產(chǎn)品編號(hào) 61202 下載。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40 μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性

對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分：

成分

N+2 個(gè)

樣品管

PCR 陰性

對(duì)照

PCR 陽(yáng)性

對(duì)照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

蜂房小甲蟲(chóng) PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 個(gè)樣品 DNA 模板 各 18 μL - -

樣品制備陰性對(duì)照（超純水） - 18 μL -

蜂房小甲蟲(chóng) PCR 的 1 萬(wàn)倍稀釋液 - - 18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過(guò)程 溫度 時(shí)間

預(yù)變性 95℃ 5 min

PCR 反應(yīng)

（35 個(gè)循環(huán)）

95℃ 15 sec

55℃ 15 sec

72℃ 60 sec

后延伸 72℃ 10 min

三、電泳檢測(cè)

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix

在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。預(yù)期的 PCR

產(chǎn)物長(zhǎng)度為 109bp。陽(yáng)性對(duì)照必須有此條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)

增，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR

擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 蜂房小甲蟲(chóng)可視化 LAMP 擴(kuò)增試劑盒