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產(chǎn)品及特點 沙門氏菌（Salmonella）引起的中毒病例在世界各地的食物中毒病例中所占數(shù)量比例非常高。在我國，70-80%細菌性食物中毒事件是由沙門氏菌引起的， 沙門氏菌的檢測已成為食品質(zhì)量安全監(jiān)控的必檢衛(wèi)生指標。本試劑盒就是針對沙門氏菌腸毒素 stn 基因設計特異性引物，利用實時熒光定量 PCR 技術開發(fā)的沙門氏菌檢測試劑盒，它通過熒光染料實時顯示樣品模板 DNA 的量，并通過坐標曲線表示出來，結果直觀準確。它具有下列特點：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡單，定量準確快速。
2.熒光定量 PCR 檢測，反應特異性強。
3.本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
規(guī)格及成分  成分 編號 50 次塑料袋包裝 
  2×qPCR Mix 90408 1.0 mL 
  stn 專一性引物對 yw13891390 100 μL 
  stn 陽性對照
（1.5×10E9 拷貝/μL） 
yw13911392 
10 μL 
  超純水 100935 1 mL 
  使用手冊 1 份 
運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑 樣品等
使用方法 一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取細菌樣品 DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 stn 標準曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃
度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
1.標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3.先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到

 10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4.在 6 號管中加入 5  μL 10E7 拷貝/μL  的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5.換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5 拷貝/μL 的陽性對照。
6.換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。
7.NC 管中不加任何陽性對照。
8.從 1-6 號管中分別取 5  μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值， 并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標準曲線。
三、PCR 檢測（20 μL 體系）
1.在 PCR 管中加入下列成分（待測樣品需要做三次重復，下表只列出一次）：

注:僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對照，其他熒光 PCR 儀器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。
2.建議 PCR 反應參數(shù)（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）
  過程 溫度 時間 
  預變性 93℃ 5 min 
  PCR 反應
（40 個循環(huán)） 93℃ 35 s 
   55℃ 45 s

 
3. 數(shù)據(jù)采集
具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結合
DNA 時，大吸收光譜在 471 nm，結合 DNA 時的大吸收光譜在 500 nm， 大發(fā)射光譜在 530 nm。
四、數(shù)據(jù)處理
以 stn 陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸，以 Ct 值為縱軸，通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
關聯(lián)產(chǎn)品 鸚鵡熱衣原體熒光定量 PCR  檢測試劑盒（CAT#:11-3780）