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RTS BL21(DE3)表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞使用方法
2023-5-18 閱讀(431)
RTS BL21(DE3)表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞使用方法
RTS（Room Temperature Stable）系列感受態(tài)細(xì)胞，其室溫可保存3天、-20°C可保存2年（推薦保存溫度）、-80°C可長期保存性能無下降。運(yùn)輸過程中無需干冰，可常規(guī)冰袋運(yùn)輸（推薦運(yùn)輸溫度）。RTS表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞均為熱激感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)用于蛋白表達(dá)（不可用于克隆和載體構(gòu)建），經(jīng)42°C熱激1min可獲得105～106cfu/μg效價(jià)，可滿足質(zhì)粒轉(zhuǎn)化要求。該制品使用簡單、運(yùn)輸、儲(chǔ)存方便。
使用方法
1. 從-20°C冰箱中取出Nano E.coli Transfection Reagent融化，放置于冰上。
注意：該試劑含長鏈帶電化合物，允許反復(fù)凍融20次，使用完畢后繼續(xù)-20°C保存。
2. 取50 μl Nano E.coli Transfection Reagent置于0.2 ml EP管中，加入10～100 ng質(zhì)粒DNA（不可使用連接產(chǎn)物），槍頭吹打混合均勻，冰上放置2min。
注意：放置時(shí)間不要超過30min，過長時(shí)間會(huì)導(dǎo)致核酸聚合，從而影響轉(zhuǎn)化效價(jià)。
3. 將上述混合物（50 μl Nano E.coli Transfection Reagent和質(zhì)粒DNA）加入到一支RTS表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞干粉中，槍頭輕輕吹打，溶解細(xì)胞干粉，置于冰上15min。
注意：使用RTS 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞干粉，輕甩干粉至管底部，如果發(fā)現(xiàn)干粉已經(jīng)溶解則不可使用。
4. 置于42°C熱激1min后，迅速置于冰上急冷2min。
5. 將熱激完畢的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有450 μl不含抗生素的SOC（或LB）培養(yǎng)基，37°C振蕩（225 rpm）培養(yǎng)60min。使質(zhì)粒上抗性標(biāo)記基因表達(dá)，菌體復(fù)蘇。
6. 取200 μl復(fù)蘇菌液涂布到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂平板表面。
7. 將平板置于37°C培養(yǎng)，12~18小時(shí)后可出現(xiàn)菌落。
8. 獲得的表達(dá)菌，可使用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，從而獲得重組蛋白。
