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樣本中，干擾物質(zhì)如何消除呢？
2025-2-17 閱讀(223)
我們都知道，在實際檢測過程中，試劑可能會受到各種干擾物質(zhì)的影響，導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果。這些干擾物質(zhì)可以分為內(nèi)源性和外源性兩類。內(nèi)源性干擾物質(zhì)通常是由于樣品本身的特性或病理原因產(chǎn)生的，如異嗜性抗體、自身抗體、補(bǔ)體等；而外源性干擾物質(zhì)則主要來自樣品處理或檢測過程中的外部因素，如脂血、溶血、黃疸等。本文將詳細(xì)介紹免疫實驗中常見的干擾物質(zhì)及其干擾消除方法。
一、內(nèi)源性干擾物質(zhì)及其干擾消除方法：
1、異嗜性抗體（Heterophil antibody, HA）：異嗜性抗體是一類針對定義不明確的抗原產(chǎn)生的具有多重特異性的免疫球蛋白。它們通常顯示弱親和力，能與多種動物制成的生物制劑的抗體結(jié)合，從而干擾測定結(jié)果。它們可以導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果，特別是在HIV、AFP、CA125、PCT等檢測中尤為常見。
為了消除異嗜性抗體的干擾，可以采用以下幾種方法：
?（1）使用與檢測/捕獲抗體亞型一致的動物Ig?：這可以通過特異性結(jié)合來消除異嗜性抗體的干擾。
?（2）?使用阻斷劑?：阻斷劑可以封閉異嗜性抗體的結(jié)合位點(diǎn)，從而減少其干擾。常用的阻斷劑包括正常動物血清的混合物，這些混合物可以有效地吸收異嗜性抗體。
??（3）樣本稀釋和連續(xù)稀釋檢測?：將樣本倍數(shù)稀釋后再檢測，若測值呈非線性，說明存在干擾物。這種方法可以幫助確認(rèn)異嗜性抗體的存在。
2、自身抗體：自身抗體是針對自身抗原成分產(chǎn)生的一類抗體，它們可能與惡性疾病或自身免疫功能紊亂有關(guān)。如抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素、抗甲狀腺激素抗體等，這些抗體能與相應(yīng)靶抗原形成復(fù)合物，從而干擾測定結(jié)果。
消除自身抗體干擾的方法包括：
?（1）?使用理化方法將其解離后再測定?：這可以通過改變樣本的pH值、溫度或添加特定的化學(xué)試劑來實現(xiàn)。
?（2）?使用阻斷劑?：阻斷劑可以封閉自身抗體的結(jié)合位點(diǎn)，從而減少其干擾。例如，不同濃度的PEG可沉降不同分子量大小的蛋白，有助于消除自身抗體引起的干擾。
?（3）?更換原料抗體的種屬?：有時候，改變原料抗體的種屬可以降低與自身抗體結(jié)合的可能性。
3、補(bǔ)體（Complement）：補(bǔ)體是一種血清蛋白質(zhì)，存在于人和脊椎動物血清及組織液中。在免疫檢測系統(tǒng)中，抗體固相包被或標(biāo)記導(dǎo)致抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其Fc段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)暴露，C1q橋聯(lián)導(dǎo)致假陽性結(jié)果。
為了消除補(bǔ)體的干擾，可以采用以下方法：
??（1）使用EDTA處理樣本?：EDTA可以與補(bǔ)體結(jié)合，從而使其失去活性。通常使用終濃度為10～40 mmol/L的EDTA溶液處理樣本。
??（2）加熱樣本?：將樣本在53℃加熱10分鐘可以滅活補(bǔ)體C1q，從而減少其干擾。
二、外源性干擾物質(zhì)及其干擾消除方法：
1、脂血：脂血是臨床檢驗中一種常見的干擾檢測的樣本性狀。發(fā)生脂濁的血清樣本中含有大量的乳糜微粒和極低密度脂蛋白，這些物質(zhì)具有光散射的特性，會產(chǎn)生濁度，從而影響反應(yīng)的吸光度值或使產(chǎn)物的顏色發(fā)生變化。
消除脂血干擾的方法包括：
2、樣本稀釋?：使用0.9%氯化鈉溶液稀釋法可以去除乳糜，減少干擾。
?3、使用離心分離技術(shù)?：通過離心分離去除樣本中的乳糜微粒和極低密度脂蛋白。
4、溶血：溶血時，紅細(xì)胞破裂會釋放出血紅蛋白、胰島素降解酶、鐵蛋白等物質(zhì)，這些物質(zhì)會干擾測定結(jié)果。
消除溶血干擾的方法包括：
??（1）?設(shè)置適當(dāng)?shù)母辈ㄩL?：通過調(diào)整檢測波長來減少血紅蛋白等物質(zhì)的干擾。
??（2）?使用Hb單克隆抗體處理樣本?：Hb單克隆抗體可以特異性地結(jié)合血紅蛋白，從而減少其干擾。
??（3）黃疸：黃疸時，膽-紅-素水平升高，膽紅素通過本底干擾、光譜干擾影響測定結(jié)果。
5、消除黃疸干擾的方法包括：
（1）?設(shè)置合適的副波長?：通過調(diào)整檢測波長來減少膽紅素的干擾。
（2）?樣本預(yù)稀釋?：通過稀釋樣本來降低膽紅素的濃度，從而減少其干擾。
三、其他干擾消除方法：
除了針對特定干擾物質(zhì)的消除方法外，還有一些通用的干擾消除方法可以在實驗試劑的研制和應(yīng)用中使用：
?1、使用免疫阻斷劑?：免疫阻斷劑可以用來封閉或清除樣本中潛在的干擾物質(zhì)。阻斷劑分為被動阻斷劑和主動阻斷劑。主動阻斷劑可以特異、主動、高效地中和干擾抗體，從而消除其干擾。
2、優(yōu)化反應(yīng)條件?：通過調(diào)整酸堿度、離子強(qiáng)度、溫度、抗原抗體比例、反應(yīng)時間等條件來優(yōu)化免疫反應(yīng)，減少干擾物質(zhì)的影響。
?3、改進(jìn)檢測方法?：采用更靈敏、更特異的檢測方法可以減少干擾物質(zhì)的影響。例如，使用納米顆粒標(biāo)記的免疫檢測方法可以提高檢測的靈敏度和特異性。
最后，我們在實際應(yīng)用中，應(yīng)根據(jù)樣本特性和檢測要求選擇合適的干擾消除方法，以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
