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南京億迅生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 質(zhì)控樣品,人工血清,人工胃液,elisa試劑盒,化學試劑,生物試劑 |
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| 參考價 | ￥ 260 |
| 訂貨量 | 3 支 |
- 型號
- 品牌
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
- 所在地 南京市
更新時間：2020-06-18 16:46:33瀏覽次數(shù)：484
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HRP標記兔抗人IgA
本產(chǎn)品僅用于研究用途，不用于人類、治療或診斷應用。
| 抗體來源 | Rabbit |
| 克隆類型 | Polyclonal |
| 交叉反應 | hu |
| 產(chǎn)品應用 | WB=1:1000-10000 ELISA=1:1000-10000 IHC-P=1:100-1000 IHC-F=1:100-1000 not yet tested in other applications. optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user. |
| 分 子 量 | 170kDa |
| 性 狀 | Lyophilized or Liquid |
| 濃 度 | 2mg/1ml |
| 免 疫 原 | Full length plasma protein: |
| 亞 型 | IgG |
| 純化方法 | affinity purified by Protein A |
| 儲 存 液 | 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol. |
| 保存條件 | Storage: Store at –20 oC for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20oC. When reconstituted in sterile distilled water or diluent supplied, theantibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.0 |
辣根過氧化物酶(HRP)標記
(HRP)標記單抗和多克隆抗體的常用方法是過碘酸鈉法。其原理是HRP的糖基用過碘酸鈉氧化成醛基,加入抗體lgG后該醛基與lgG氨基結(jié)合,形成Sch氏堿。為了防止HRP中糖的醛基與其自身蛋白氨基發(fā)生偶合,在用過碘酸鈉氧化前先用二硝基氟苯阻斷氨基。氧化反應末了,用朋氫化鈉穩(wěn)定Schf氏堿。這里介紹兩種程序。
程序一
(1)將5 mg HRP溶于0.5m0.1 mol/L NaHCO3溶液中 加 0.5ml 10mmoLNaO4溶液,混勻,蓋緊瓶塞,室溫避光作用2小時。
(2)加075m0. mol/L Na2CO3混勻。
(3)加入0.75m小風已處理的腹水,或純化單抗等(15mgm),混勻。
(4)稱取 Sephadex G25干粉0.3g 加入一支下口墊玻璃棉的5m注射器外筒內(nèi);隨后籽上述交聯(lián)物移入注射器外套;蓋緊,室溫作用(避光)3小時或4°C過夜。
HRP標記兔抗人IgA
(5)用少許PBS將交聯(lián)物全部洗出,收集洗出液,加1/20V體積新鮮配制的5mg/ml
NaBH4溶液,混勻,室溫作用30分鐘;再加入320 V NaBH4溶液,混勻,室溫作用1小時或4過夜)
(6)將交聯(lián)物過 Sephadex g200或 Sepharose6B(2.6×50cm層析純化,分管收集第Ⅰ 峰。(7)酶結(jié)合物質(zhì)量鑒定
克分子比值測定 酶量(mg/m)=OD403 ×0.4
IgG量(mg/m)=(OD280OD403×0.3)×062克分子比值(EP=酶量×4/gG量,一般在12之間。
酶結(jié)合率=酶量x體積/抗體,標記率一般為03-0.6,即1-2個HRP分子結(jié)合在一個抗體分子,標記率可大于06,080.90D4030D280等于04時,EP約為1
標記率=OD4030D280
酶活性和抗體活性的測定可應用E凵SA法、免疫擴散
DABH2O2顯色反應測定酶結(jié)合物的酶活性,抗體活性及效
價、特異性。
(8)HRP抗體結(jié)合物的保存:加入等量甘油后,小量分裝-20°℃存放,防止反復凍融;或加入等量60%甘油4℃保存;不宜加NaN3或酚防腐,否則會影響酶活性。必要時凍干保存,以BSA或脫脂牛奶作保護劑。
程序二:
(1)將5 mg HRP溶于0.3 mol/L PH8.1NaHCO3溶液中,加入1%二硝基氟苯無水乙醇溶液0.1ml室溫攪拌作用1小時,以封閉HRP分子上的a和ε氨基。(2)再加1ml 0.06moL過碘酸鈉溶液,在室溫中避光輕攪30分鐘,溶液呈黃綠色:隨后加1ml 0.06moL 乙二醇，輕攪1小時，中止氧化反應。
(3)移入透析袋中，在1000ml 0.01mol/LPH9.5碳酸鹽緩沖液中，4°C透析過夜，更換三次緩沖液，
注意避光。
(4)吸取上述醛化好的HRP溶液3ml,加入5mgIgG的碳酸鹽緩沖液1ml,室溫輕攪2-3小時，避光;加入5mg NaBH4 4°C放置3小時或過夜，或換用乙醇胺(2mol/L
PH9.5)0.2ml，作用| 7小時。(5)再移入透析袋中，在0.02mol/L PH7.4 PBS中透析
24小時，更換三次緩沖液。
單體IgA占血清免疫球蛋白的5-15%，而二聚IgA則局限于粘膜表面，如唾液、胃腸道分泌物、支氣管液和牛奶。粘膜IgA通過中和粘膜表面的感染因子，在宿主防御中發(fā)揮重要作用。這種產(chǎn)生通常是局部的，抗原特異性IgA產(chǎn)生的B細胞可以在固有層下的區(qū)域找到，在那里成熟為產(chǎn)生二聚IgA的漿細胞。IgA缺乏是常見的免疫缺陷，可能影響血清和粘膜產(chǎn)生的IgA。
