guansuan是20種蛋白氨基酸之一。guansuan的羧酸根陰離子和鹽被稱為guansuan。guansuan是重要的神經(jīng)遞質(zhì),在長期增強(qiáng)中起關(guān)鍵作用,對學(xué)習(xí)和記憶很重要。guansuan是GABA的前體,但功能卻相反。它可能在心臟和前列腺的正常功能中起作用。guansuan是穿越血腦屏障的少數(shù)營養(yǎng)素之一,用于治療抑郁癥,ADD和ADHD,疲勞,酒精中毒,癲癇,肌肉營養(yǎng)不良,智力低下和精神分裂癥等疾病。Amplite™熒光guansuan含量測定試劑盒提供了快速靈敏的方法來測定各種生物樣品中的guansuan。在化驗(yàn)中 偶聯(lián)的酶系統(tǒng)催化L-guansuan與NADP之間的反應(yīng)生成NADPH,NADPH傳感器可以特異性識別該NADPH,并將其循環(huán)回NADP。在反應(yīng)過程中產(chǎn)生紅色的熒光產(chǎn)物。信號可以通過熒光酶標(biāo)儀或吸光度酶標(biāo)儀讀取。使用我們的Amplite™熒光guansuan試劑盒,在100 µL反應(yīng)體積中,我們檢測到的guansuan含量僅為10 µM。該測定法是魯棒的,并且可以容易地適用于需要測量guansuan的多種應(yīng)用。信號可以通過熒光酶標(biāo)儀或吸光度酶標(biāo)儀讀取。使用我們的Amplite™熒光guansuan試劑盒,在100 µL反應(yīng)體積中,我們檢測到的guansuan含量僅為10 µM。該測定法是魯棒的,并且可以容易地適用于需要測量guansuan的多種應(yīng)用。信號可以通過熒光酶標(biāo)儀或吸光度酶標(biāo)儀讀取。使用我們的Amplite™熒光guansuan試劑盒,在100 µL反應(yīng)體積中,我們檢測到的guansuan含量僅為10 µM。該測定法是魯棒的,并且可以容易地適用于需要測量guansuan的多種應(yīng)用。
熒光酶標(biāo)儀 | |
激發(fā) | 540納米 |
發(fā)射 | 590納米 |
隔斷 | 570納米 |
推薦板 | 純黑色 |
組分A:酶混合物 | 1瓶(凍干粉) |
組分B:測定緩沖液 | 1瓶(10毫升) |
成分C:NADP | 1個小瓶 |
組分D:guansuan | 1個小瓶 |
組分E:稀釋緩沖液 | 1瓶(10毫升) |
協(xié)議摘要
準(zhǔn)備guansuan標(biāo)準(zhǔn)品和/或測試樣品(50 µL)
加入guansuan工作溶液(50 µL)
在室溫下孵育30分鐘-2小時
監(jiān)測Ex / Em = 540/590 nm(截止= 570 nm)的熒光強(qiáng)度
重要說明
開始實(shí)驗(yàn)之前,請在室溫下解凍所有試劑盒組件。
儲備溶液的制備
除非另有說明,否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣,并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. NADP儲備溶液(200X):
將100 µL稀釋緩沖液(組分E)添加到NADP(組分C)小瓶中,制成200X NADP儲備溶液。
2.guansuan標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 mM):
將200 µL稀釋緩沖液(組分E)添加到小瓶guansuan(組分D)中,制成100mMguansuan標(biāo)準(zhǔn)溶液。
為了方便起見,請使用我們的系列稀釋計
取100 mMguansuan標(biāo)準(zhǔn)溶液,并在稀釋緩沖液(組分E)中以1:100的比例配制1000 µMguansuan標(biāo)準(zhǔn)溶液(SD7)。取1000 µMguansuan標(biāo)準(zhǔn)溶液(SD7)并進(jìn)行1:3連續(xù)稀釋,以使用稀釋緩沖液(組分E)獲得系列稀釋的guansuan標(biāo)準(zhǔn)溶液(SD6-SD1)。
準(zhǔn)備工作溶液
1.將10 mL的測定緩沖液(組分B)添加到酶混合瓶(組分A)中。
2.將50 µL 200X NADP儲備溶液添加到Enzyme Mix瓶中,并充分混合以制成guansuan工作溶液。 注:guansuan工作液是夠兩個96孔板。它在室溫下不穩(wěn)定,應(yīng)在2小時內(nèi)及時使用,并避免暴露在光線下。 注意: 可替換地,可以通過加入200μL的使酶混合物原液50X ? 2 ?入瓶酶混合物(組分A),然后由儲備溶液混合制備guansuan工作溶液 用測定緩沖液(組分B)和200X NADP儲備溶液成比例。
程序
表1.黑色96孔微孔板中g(shù)uansuan標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局。SD =guansuan標(biāo)準(zhǔn)液,BL =空白對照,TS =測試樣品。
BL | BL | TS | TS |
SD1 | SD1 | ... | ... |
SD2 | SD2 | ... | ... |
SD3 | SD3 | ||
SD4 | SD4 | ||
SD5 | SD5 | ||
SD6 | SD6 | ||
SD7 | SD7 |
表2. 每個孔的試劑組成
好 | 體積 | 試劑 |
SD1-SD7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋(1至1000 µM) |
BL | 50微升 | 稀釋緩沖液(組分E) |
TS | 50微升 | 樣品 |
根據(jù)表1和2中提供的布局,準(zhǔn)備guansuan標(biāo)準(zhǔn)液(SD),空白對照(BL)和測試樣品(TS)。對于384孔板,每孔使用25 µL試劑代替50 µL。
將50 µLguansuan工作溶液添加到guansuan標(biāo)準(zhǔn)品,空白對照和測試樣品的每個孔中,使guansuan的總測定體積為100 µL /孔。 對于384孔板,將25 µLguansuan工作溶液添加到每個孔內(nèi),總體積為50 µL /孔。
在避光的條件下,將反應(yīng)在室溫下孵育30分鐘至2小時。
使用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)= 530-570 nm,發(fā)射= 590-600 nm(Ex / Em = 540/590 nm),截止= 570 nm時監(jiān)控?zé)晒獾脑黾印? 注意: 該板的內(nèi)容物也可以轉(zhuǎn)移到白色透明底板上,并由吸光度微板讀取器以?570 nm??605 nm(A575nm / A605nm)的吸光度比進(jìn)行讀取。與熒光讀數(shù)相比,吸收檢測的靈敏度較低。
Amplite™熒光法guansuan檢測試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Glutamic Acid Assay Kit *Red Fluorescence* 200 Tests Amplite™熒光法guguanggantai檢測試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Glutathione Assay Kit *Green Fluorescence* 200 Tests Amplite™熒光法guguanggantaiGSH/GSSG比率檢測試劑盒 *綠色熒光* Amplite™ Fluorimetric Glutathione GSH/GSSG Ratio Assay Kit *Green Fluorescence* 200 Tests Amplite™熒光法甲醛定量試劑盒 *綠色熒光* Amplite™ Fluorimetric Formaldehyde Quantitation Kit *Green Fluorescence* 200 Tests Amplite™比色法尿素定量試劑盒 *藍(lán)色* Amplite™ Colorimetric Urea Quantitation Kit *Blue Color* 200 Tests