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上海斯邁歐分析儀器有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 氣相色譜、液相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用儀、液質(zhì)聯(lián)用儀、原子吸收光譜儀、紫外分光光度計(jì) |
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優(yōu)化樣品前處理實(shí)現(xiàn)草本茶中農(nóng)藥殘留的液質(zhì)聯(lián)用儀分析
2022-5-19 閱讀(514)
前言：草本茶已深深融入到多種文化中，通常被認(rèn)為能夠改善身體健康狀況，降低各種疾病的發(fā)生，例如癌癥、中風(fēng)和骨質(zhì)疏松癥等 [1,2]。對(duì)茶的高需求量，要求實(shí)施現(xiàn)代化的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)方式，包括施用農(nóng)藥來維持茶收成的穩(wěn)定。無論是允許還是禁止使用的農(nóng)藥，其最大殘留*越來越低，因此對(duì)草藥制品中頗多種類農(nóng)藥的檢測(cè)就需要快速、穩(wěn)定且高效的方法 [3]。該方法中至關(guān)重要的一步就是樣品前處理，尤其針對(duì)植物性基質(zhì)，它們往往非常復(fù)雜，且包含有干擾的基質(zhì)化合物，導(dǎo)致離子抑制、共流出和儀器污染。本研究采用快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、高效、耐用且安全的稱之為 QuEChERS 的技術(shù)完成草本紅茶和綠茶樣品的前處理。QuEChERS 包括如下三個(gè)簡(jiǎn)便的步驟：1) 采用有機(jī)溶劑和分配劑鹽進(jìn)行萃取；2) 采用吸附材料（分散吸附劑）進(jìn)行樣品凈化；3) 液相色譜或氣相色譜分析，或兩者均采用 [4,5]。分散凈化吸附劑包括 C18、N-丙基乙二胺 (PSA) 和石墨化碳黑 (GCB)。對(duì)于包含大量色素的茶樣品，GCB 的使用越來越重要；但必須謹(jǐn)慎使用，因?yàn)樗矔?huì)移除目標(biāo)分析物，尤其是具有平面結(jié)構(gòu)的化合物。采用 Agilent Bond Elut QuEChERS 預(yù)稱量的試劑盒優(yōu)化 QuEChERS 方法，實(shí)現(xiàn)快速簡(jiǎn)便的方法開發(fā)。該方法可以充分凈化高度著色的樣品，大多數(shù)農(nóng)藥的回收率高，重現(xiàn)性好，平面結(jié)構(gòu)農(nóng)藥沒有明顯的保留損失。
材料與方法HPLC 級(jí)乙腈購自 Honeywell International, Inc.。反滲透水采用Millipore 水純化系統(tǒng)制備。甲酸 (98%) 為 ACS 級(jí)，購自 SigmaAldrich 公司。茶樣品來自多家供應(yīng)商，由合作者友情提供。標(biāo)樣來自 Accustandards 公司，為濃度 100 µg/mL 的乙腈溶液。將它們混合并用乙腈稀釋到適當(dāng)濃度，儲(chǔ)存在冷凍箱 (–3 oC) 內(nèi)。樣品前處理萃?。哼m用于 10 g 樣品的 Agilent Bond Elut QuEChERS Original萃取管（部件號(hào) 5982-5550）分散 SPE 凈化：Agilent Bond Elut QuEChERS 分散通用試劑盒，15 mL 分散 SPE 管（400 mg PSA，400 mg C18，45 mg GCB，1200 mg MgSO4）（部件號(hào) 5982-0029）過濾：Captiva Premium 注射式過濾器，尼龍膜，15 mm，0.2 µm（部件號(hào) 5190-5088）QuEChERS 萃取稱取干茶葉1±0.01 g，置50mL離心管中，按照要求給樣品加標(biāo)。于離心管中加水 10 mL，加蓋并渦旋 1 min。樣品*潤(rùn)濕后，將濃度 50 ng/mL的內(nèi)標(biāo)（樂果-d6、敵草隆-d6 和二嗪農(nóng)-d10）乙腈溶液 (10 mL) 加入離心管中，加蓋，手動(dòng)振搖 1 min，然后置超聲水浴中超聲 15 min。取出離心管，加入 Bond Elut QuEChERSOriginal 萃取鹽（4 g MgSO4，1 g NaCl），然后將離心管手動(dòng)強(qiáng)力振搖 1 min。隨后將樣品以 4000 rpm 的轉(zhuǎn)速離心 5 min，實(shí)現(xiàn)水相和有機(jī)相溶劑的分離（圖 1，步驟 1）。
分散固相萃取離心后，將 6 mL 上層乙腈溶液轉(zhuǎn)移到 Bond Elut QuEChERS 分散通用試劑盒的 15 mL 離心管中。將離心管渦旋 1 min，然后以4000 rpm 的轉(zhuǎn)速離心 3 min。離心后，取 2 mL 凈化的萃取液加入 10 mL 試管中，氮?dú)饬鞔抵两?。采?0.7 mL H2O + 0.1% 甲酸 (FA) 混合溶劑、0.2 mL 乙腈，以及 0.1 mL 乙腈或校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)液復(fù)溶樣品。接著，將樣品注射式過濾至自動(dòng)進(jìn)樣器樣品瓶中，用于 LC/MS/MS 分析（圖 1，步驟 2）。
表 1 為化合物分析的 MS/MS 參數(shù)，圖 2 是所有加標(biāo)濃度 100 ppb農(nóng)藥的 MRM 疊加色譜圖。
校準(zhǔn)曲線和線性通過混合安瓿中的認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)液來制備儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)液。將儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)液用乙腈適當(dāng)稀釋來制備工作標(biāo)準(zhǔn)液。溶劑復(fù)溶時(shí)，將適量的工作標(biāo)準(zhǔn)液加入經(jīng) QuEChERS 萃取的空白綠茶和紅茶樣品中，制備基質(zhì)匹配的標(biāo)樣，濃度分別為 0.5、1、5、10、20、50、100 和200 ng/mL。將三種內(nèi)標(biāo)加入所有樣品，濃度 50 ng/mL，并采用完整 QuEChERS 工作流程進(jìn)行萃取。通過這些標(biāo)樣得到線性校準(zhǔn)曲線，R2 不小于 0.992（數(shù)據(jù)未顯示）。
結(jié)果與討論QuEChERS 萃取鹽和凈化試劑盒的選擇為了實(shí)現(xiàn)最高的回收率和重現(xiàn)性，本研究評(píng)價(jià)了幾種萃取鹽試劑盒。在測(cè)試了 Bond Elut QuEChERS Original、AOAC 2007.01 和EN 15662 萃取鹽后，我們發(fā)現(xiàn)包含 1 g NaCl 和 4 g MgSO4 的原萃取試劑盒可獲得總體上最高的回收率。由于大量色素會(huì)與目標(biāo)分析物一同萃取出來，因此，選擇包含 GCB 的分散凈化試劑盒是非常必要的。我們發(fā)現(xiàn)，使用包含 PSA、C18、GCB 和 MgSO4的 Bond Elut QuEChERS 通用試劑盒，可以獲得明顯更潔凈的樣品，以及更高的回收率，并且僅極小到中等程度地保留平面結(jié)構(gòu)農(nóng)藥（多菌靈、噻菌靈、三環(huán)唑和嘧霉胺）?；厥章逝c重現(xiàn)性對(duì)于綠茶和紅茶基質(zhì)中的 176 種農(nóng)藥，絕大多數(shù)使用本方法均可獲得優(yōu)異的回收率和重現(xiàn)性。對(duì)于綠茶樣品，濃度 10 ppb 82% 農(nóng)藥的回收率和濃度 100 ppb 92% 農(nóng)藥的回收率，均在 70 - 120%范圍內(nèi)。對(duì)于紅茶樣品，濃度 10 ppb 76% 農(nóng)藥的回收率和濃度100 ppb 88% 農(nóng)藥的回收率均在 70 - 120% 范圍內(nèi)。如圖 3 所示，還有較少農(nóng)藥的回收率低于 50% 并且有一些農(nóng)藥未能檢出。表 2列出了全部農(nóng)藥以及各自的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。
