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上海斯邁歐分析儀器有限公司
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液相色譜分析倍他樂克片降解產(chǎn)物中的應(yīng)用
2023-3-25 閱讀(77)
摘要Agilent 1200 系列液相色譜方法開發(fā)解決方案具有最大的靈活性和高度自動化。本文將該系統(tǒng)用于尋找分析藥物降解產(chǎn)物的最佳分離條件。以倍他樂克片為例，將其暴露在高溫條件下，使其產(chǎn)生降解產(chǎn)物，在幾根色譜柱上進(jìn)行了如下分析：• 用安捷倫化學(xué)工作站方法篩選向?qū)ё詣釉O(shè)置方法和序列• 不同選擇性的 6 根 Agilent ZORBAX RRHT 色譜柱• 不同流動相• 不同溫度和梯度
前言在進(jìn)行新藥開發(fā)時，分析活性藥物的存放期限和穩(wěn)定性非常重要，必須確保最終的片劑不會生成無法預(yù)期和潛在有害的降解產(chǎn)物。這些片劑要在不同條件下進(jìn)行破壞試驗，并分析其降解產(chǎn)物，一般采用HPLC 法。為了保證沒有其它異常化合物與主成分共洗脫，必須確定所用的分析方法可以分離樣品中的所有化合物。因此，需要進(jìn)行液相色譜分析方法開發(fā)。一般來說，為了實現(xiàn)快速篩選，并對方法最終微調(diào)獲得良好的起始條件，開始要試驗一系列色譜柱和溶劑。這種方法篩選過程有助于找到分離目標(biāo)系列化合物的最適宜色譜柱和流動相。通常，由于整個過程不能自動進(jìn)行，所以非常費時。Agilent 1200 系列液相色譜方法開發(fā)解決方案提供了一個高度靈活的系統(tǒng)，最多可以使用 8 根 100 mm 長的色譜柱，或 6 根300 mm 長色譜柱。另外，安捷倫化學(xué)工作站的方法篩選向?qū)⒆詣釉O(shè)置方法和序列，以篩選各種色譜柱、溶劑、預(yù)設(shè)梯度和溫度的組合。另外，為了進(jìn)行全自動方法開發(fā)和優(yōu)化，該系統(tǒng)還可以與復(fù)雜的方法開發(fā)軟件相結(jié)合，如：• 來 自 ACD/Labs 用于化學(xué)工作站的ACD/AutoChrom• 來自 ChromSword Baltic在本應(yīng)用報告中，我們將報導(dǎo)：• 以倍他樂克片降解產(chǎn)物為例，如何用安捷倫化學(xué)工作站方法篩選向?qū)гO(shè)置序列• 用 6 根不同色譜柱和兩套不同流動相分析降解產(chǎn)物• 用一根色譜柱和兩種不同梯度，采用兩種不同溫度進(jìn)行微調(diào)
實驗儀器Agilent 1200 系列高分離度快速液相色譜系統(tǒng)，組合了 Agilent 1200 系列液相色譜方法開發(fā)解決方案。該液相色譜系統(tǒng)由以下模塊組成，固件版本 A.06.01 或更高：• Agilent 1200 系列 SL 型二元泵，配置脫氣機• Agilent 1200 系列 SL plus 高效自動進(jìn)樣器• 2 個 Agilent 1200 系列 SL plus 柱溫箱(G1316C)，已安裝閥驅(qū)動• 安捷倫方法開發(fā)閥工具包，高壓• 安捷倫方法開發(fā)毛細(xì)管工具包，低擴散，適用于短柱• Agilent 1200 系列 SL 型二極管陣列檢測器（DAD）• 幾根 Agilent ZORBAX 快速分離高通量（RRHT）色譜柱，1.8 µm 填料粒徑• 安捷倫化學(xué)工作站 B04.01，含安捷倫化學(xué)工作站方法篩選向?qū)悠分苽? 片含藥 50 mg 的倍他樂克片，分別研磨，并 80 °C 加熱 3 小時。殘渣溶解于 4 mL 水中。用 2 支注射式過濾器去除不溶性顆粒– 先用 Minisart 0.8 µm 過濾器，然后用安捷倫 0.45 µm 過濾器。進(jìn)樣 1 微升濾液至液相色譜系統(tǒng)。
結(jié)果和討論安捷倫化學(xué)工作站方法篩選向?qū)О步輦惢瘜W(xué)工作站方法篩選向?qū)前步輦惢瘜W(xué)工作站的附加軟件。用于以簡便而合理的方式生成方法和序列表，以篩選選定的色譜柱、溶劑、預(yù)設(shè)梯度和溫度。方法篩選實驗的設(shè)置包括幾步：
• 創(chuàng)建新的篩選實驗（圖 1）這一步包括為實驗和其根文件夾命名并加以說明，通常這是設(shè)置一個新實驗的開端。或者也可以調(diào)用或修改預(yù)定義的篩選實驗。當(dāng)最初方法篩選的標(biāo)準(zhǔn)化步驟必須用新樣品重復(fù)時，這種方式將非常有用。
• 確定篩選實驗（圖 2）這一步包括選擇主要方法和實驗范圍。在篩選過程中所有保持不變的參數(shù)（例如，檢測器設(shè)置）均來自主要方法。
• 設(shè)置色譜柱篩選（圖 3）在這個屏幕上，選擇了要評價的色譜柱。這里列出的色譜柱必須在儀器界面中的更多柱溫箱組合>配置色譜柱屏幕中預(yù)先確定>，這樣才能被安捷倫化學(xué)工作站方法篩選向?qū)ё詣幼R別。
• 設(shè)置溶劑選擇（圖 4）安捷倫化學(xué)工作站方法篩選向?qū)ёR別系統(tǒng)中有哪種類型的泵（二元泵或四元泵）。還要確定是外部溶劑選擇閥（G1160A）還是內(nèi)部溶劑選擇閥（只用于二元泵）。軟件中顯示的溶劑為其預(yù)先定義的名字。
