細胞培養(yǎng)方法:

 1.細菌污染 

    細菌污染是實驗室細胞培養(yǎng)中常見的污染，即使在細胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素，也可能因為操作不慎而引起污染。常見的有革蘭氏陽性菌，如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性菌，其中又以白色葡萄球菌較常見。 

 培養(yǎng)細胞受細菌污染后，會出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁，pH改變。污染后細胞發(fā)生病理改變，胞內(nèi)顆粒增多、增粗，變圓脫落死亡。 

 2.真菌污染 

    真菌污染是細胞培養(yǎng)過程中常見的一種，常見的真菌有煙曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。 

 培養(yǎng)細胞受真菌污染后，可見培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺黃色的小點，有的散在生長，培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁；倒置顯微鏡下可見絲狀、管狀或樹枝狀的菌絲縱橫交錯在細胞之間或培養(yǎng)基中，有的呈鏈狀排列。 

 真菌污染后，細胞生長變慢，但后由于營養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡。 

 3.支原體污染 

    支原體是介于細菌與病毒之間能獨立生活的小微生物，小直徑0.2μm，一般過濾除菌無法去除它，光鏡下難以看清它的形態(tài)結(jié)構(gòu)。開始不易發(fā)現(xiàn)，能在偏堿條件下生存，對有抗藥性。多吸附于細胞表面或散在于細胞之間。 

 培養(yǎng)細胞受支原體污染后，部分敏感細胞可見細胞生長增殖變慢，部分細胞變圓，從瓶壁脫落。但多數(shù)細胞污染后無明顯變化，或略有變化，若不及時處理，還會產(chǎn)生交叉污染。 

  4.病毒污染 

    組織細胞培養(yǎng)過程中，如果沒有除去潛在的病毒，就會產(chǎn)生病毒污染。目前，從原代猴腎細胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒。

細胞?技術(shù)步驟：

1、取材

細胞株培養(yǎng)的材料主要來源于外科手術(shù)或活檢瘤組織，取材時避免用壞死組織，要挑選瘤細胞集中和活力較好的部位，瘤性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng)，因故不能立即培養(yǎng)者，可凍存。細胞株的培養(yǎng)方法及凍存方法同前述正常組織。

2、成纖維細胞排除

在細胞株培養(yǎng)中?；祀s有一些成纖維細胞，培養(yǎng)時能與瘤細胞同時生長，并常壓過癌細胞，導致癌細胞生長受阻以至消失，應(yīng)仔細排除。排除方法常有：機械刮除法、反復貼壁法、消化排除法、膠原酶消化法等。

3、提高細胞培養(yǎng)存活率和生長率

根據(jù)實驗經(jīng)驗，細胞株要經(jīng)過對新環(huán)境的適應(yīng)才能生長，因此不能局限于一般培養(yǎng)法，須采用一些特殊措施。如：用適宜底物，鼠尾膠原底層及飼細胞底層等。用細胞生長因子，根據(jù)細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子，如胰島素、雌激素等。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。