小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞提取物【Mouse Bladder：Normal Bladder Derivatives】
小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞提取物是從小鼠原代膀胱平滑肌細(xì)胞提取的，小鼠原代膀胱平滑肌細(xì)胞從正常小鼠膀胱組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠膀胱平滑肌組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

L-Norleucine10種殺菌劑混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- GILZ antibody一氮合酶運(yùn)輸因子(NOSTRIN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

L-Norvaline18種PCB混標(biāo)（HJ715水質(zhì) HJ743土壤沉積物 多氯聯(lián)苯的測定）anti- GIMAP2 antibody巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Polyethylene, High Density18種PCB混標(biāo)(GBT20387-2006 紡織品多氯聯(lián)苯的測定) 標(biāo)anti- GIMAP4 antibody趨化因子C-C-基元受體8(CCR8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

L-PyroglutaMic acid;L-GlutiMinic acid;GlutiMic acid;GlutaMic acid lactaM;α- AMinoglutaric acid lactaM;L-5-Oxo-2-pyrrolidine carboxylic acid;(S)-(-)-2-Pyrrolidone-5-carboxylic acid定制混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- GIMAP5 antibody免疫球蛋白G1(IgG1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

L-Threonine;L-β-Hydroxy-2-aMinobutyric acid;(2S,3R)-2-AMino-3-hydroxybutyric acid;(2S,3R)-(-)-Threonine苯胺類和聯(lián)苯胺類8種定制混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- GIMAP7 antibody環(huán)酸鳥苷(cGMP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

L-Thyroxine sodiuMsalt;3,3′,5,5′-Tetraiodo-L-thyronine sodiuM salt pentahydrate;SodiuM levothyroxine;Levothyroxine sodiuM;Eltroxin;Thyroxevan;硝基芳烴及環(huán)酮類16種定制混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- GINS3 antibody腫瘤蛋白p53(TP53)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

L-Thyroxine;3-[4-(4-Hydroxy-3,5-diiodophenoxy)-3,5-diiodophenyl]-L-alanine;β-[(3,5-Diiodo-4-hydroxyphenoxy)-3,5-diiodophenyl]-L-alanine戊炔草胺 標(biāo)準(zhǔn)品anti- GINS3 antibody腫瘤蛋白p53(TP53)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

L-Tyrosine;(S)-2-AMino-3-(4-hydroxyphenyl)propionic acid;3-(4-Hydroxyphenyl)-L-alanine;L-α-AMino-β-p-hydroxyphenylpropionic acid;L-α-AMino- p-hydroxyhydrocinnaMic acid吡啶 標(biāo)準(zhǔn)品anti- GIP antibody腫瘤蛋白p53(TP53)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞提取物freeze-driedT細(xì)胞2識(shí)別黑色素瘤抗原抗體anti- ZAK antibody巰蛋白(TPN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Phaeoseptoria phalaridis (Trail) Sprague, a ..肝細(xì)胞癌HHCM蛋白抗體anti- ZAP70 antibody硫嘌呤基轉(zhuǎn)移酶(TPMT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Methylobacillus flagellatus Govorukhina et ..紫外切除修復(fù)蛋白R(shí)AD23A抗體anti- ZAP70 antibody血栓烷受體(TP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Synechocystis sp.紫外切除修復(fù)蛋白R(shí)AD23B抗體anti- ZAP70 antibody胸腺生成素(TMPO)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Leptosphaeria korrae Walker et Smith, teleo ..3-羥基異酸脫酶抗體anti- ZBP1 antibody成簇蛋白(TUFT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Clavariopsis bulbosa Anastasiou, anamorphHib酰水解酶抗體anti- ZBTB10 antibodySciellin蛋白(SCEL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Roseomonas gilardii subsp. gilardii Rihs et ..腫瘤異?；鞍?抗體anti- ZBTB11 antibody分離蛋白1(SCRN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Pholiota nameko (Ito) Ito et Imai apud Imai腫瘤異常基化蛋白2抗體anti- ZBTB20 antibody同線蛋白1(ST1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。