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酵母焦磷酸酶

參  考  價:1248 - 4680
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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    其他品牌

  • 廠商性質(zhì)

    生產(chǎn)商

  • 所在地

    上海市

規(guī)格

20U 1248元 15盒可售

100U 4680元 15盒可售

更新時間:2024-05-22 11:52:49瀏覽次數(shù):154次

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貨號 XG-P3106 規(guī)格 20U、100U
包裝 盒裝 用途 僅供科研研究實驗
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酵母焦磷酸酶

酵母焦磷酸酶

貨號

規(guī)格

分類

XG-P3106

20U

核酸修飾酶系列

XG-P3106

100U

核酸修飾酶系列

無機焦磷酸酶(酵母)純化自重組 E. coli 菌株,攜帶有從釀酒酵(Saccharomycescerevisiae)克隆的 ppa基因和蟾分枝桿菌(Mycobacterium xenopi)GyrA 內(nèi)含肽的融合基因。該焦磷酸酶催化無機焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽:–4+ H20 →2HP04–2。在核酸擴增實驗中,可解除生成的無機焦磷酸鹽對反應(yīng)體系的抑制。
應(yīng)用
反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中提高 RNA 產(chǎn)量
增強 DNA 復(fù)制
儲存:-20°C 可保存 3 年。
活性定義:

1 單位指標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下(20 mM Tris-HCl,pH7.5,2 mM MgCl2,2 mM PPi,25°C 反應(yīng) 10 分鐘)每分鐘催化無機焦磷酸鹽生成 1 μmol 磷酸鹽所需的酶量。
使用注意事項:
(1) 該酶在多種反應(yīng) Buffer 中均具有活性,通常該酶在HDA 擴增、LAMP 擴增等實驗中,可直接接入即可。
(2) 該酶的用量在不同的實驗中需要優(yōu)化,通常在0.05~1 U/ml 濃度調(diào)整。
(3) 該酶的反應(yīng)溫度為 25°C,其在 16~37°C 均有活性,65°C 10min 可使該酶失活。


酵母焦磷酸酶


酵母焦磷酸酶

一、模板DNA:PCR反應(yīng)需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;

二、引物:PCR反應(yīng)的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;

三、dNTPs:PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;

四、Taq DNA聚合酶:PCR反應(yīng)需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;

五、PCR buffer溶液:對PCR反應(yīng)具有緩沖作用,調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應(yīng)特異性,從而提高反應(yīng)效率;

六、酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物;


酵母焦磷酸酶


酵母焦磷酸酶

①Oligo dT
選擇Oligo dT時,要求RNA必須有Poly A,所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT,對RNA樣品的質(zhì)量要求較高,不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應(yīng),建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT,尤其適合模板豐度很低的情況(比如某個gene表達量很低)。選擇隨機引物時,第鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板,然后進行PCR反應(yīng)時設(shè)計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關(guān)系,一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng,如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng,可能會導(dǎo)致小片段產(chǎn)物(<500bp)的增加和長片段、全長產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物(GSP)是某個基因序列的一部分,與模板互補的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進行設(shè)計。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合,每個目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此,當(dāng)分析多種目標(biāo)時,則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同,所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物,建議對退火溫度進行優(yōu)化。

酵母焦磷酸酶

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