Tte uvrD解旋酶(1mg/ml)

該蛋白來源于耐熱細菌，該蛋白具有熱穩(wěn)定條件下解旋 DNA 的能力。經(jīng)  測試，本 能解旋 5’突出、3’突出和平端雙鏈 DNA。該酶的解旋活性依賴于輔助因子 ATP 或 dATP。該酶在 45-65℃條件下均有活性，再高的溫度導致酶失活。該酶具有高的解鏈活性，因子其可潛在的用于 NanoPore測序、芯片雜交、或 tHDA 擴增中，但以上功能 未予測試。
保存液：10mM Tris-HCl，pH7.6，200mM NaCl，0.1%Tween20, 50%Glycerol。
儲存：

-20 ℃ 可保存 3 年。
使用注意事項：
（1） 該酶反應(yīng)液中需要添加 3mM ATP 或dATP 和>2mMMg2+。
（2） 該酶的功能性測試 1xBuffer 為；20mM Tris-HCl，pH7.6，50mM KCl，10mM MgCl2, 3mM ATP。由于應(yīng)用的差異，本制品不提供反應(yīng)緩沖液。
（3） 在 20μl 反應(yīng)體系中，dsDNA 2-5pmol，加入 10-20ng該制品，反應(yīng)溫度推薦采用 60℃，15-30min。由于底物的長度或類型的不同，實驗可能需要其它參數(shù)的調(diào)整。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成         等生物學過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達量很低）。選擇隨機引物時，第鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應(yīng)時設(shè)計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長片段、全長產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結(jié)合目標RNA的已知序列進行設(shè)計。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當分析多種目標時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優(yōu)化。