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貨號	XG-P2979	規(guī)格	1ml、10ml
包裝	盒裝	用途	僅供科研研究實驗

2XRAPA3GPCR Mix(with dye)

2XRAPA3GPCR Mix(with dye)

貨號	規(guī)格	分類
XG-P2979	1ml	PCR相關(guān)
XG-P2979	10ml	PCR相關(guān)

RAPA3G DNA聚合酶為經(jīng)電子重構(gòu)架的第三代Taq DNA聚合酶，第三代DNA聚合酶具有高度的雜質(zhì)耐受性、長片段擴增能力、高擴增成功率、高產(chǎn)量等特征，從而使得RAPA3G系列產(chǎn)品可用于粗制樣品的直接擴增，無需核酸純化步驟。雜質(zhì)耐受性方面，該酶可耐受植物中的多糖多酚；全血、血清、血漿中的肝素、高濃度的血紅蛋白、甘油三脂；乙醇；胍鹽；SDS等強PCR抑制劑。在血液直擴PCR實驗中，RAPA3G PCR Mix性能與KAPA3G DNA聚合酶展現(xiàn)出同等的表現(xiàn)，其性能表現(xiàn)優(yōu)于二代聚合酶（血液擴增Hemo KlenTaq Mix）。在植物直擴PCR實驗中，RAPA3G PCR Mix在配合DNA釋放劑的條件下與KAPA3G Plant PCR試劑盒性能一致。
長片段擴增能力方面，使用該酶可輕松擴增8kb的基因組片段，20kb的λ DNA，8kb的cDNA。該酶具有6kb/min以上的擴增速度，可顯著的縮短PCR的擴增時間，在常規(guī)測試條件下，10s的延伸時間可完成1kb的基因組DNA擴增。在PCR擴增成功率方面，與其它類型的PCR擴增試劑對比中，RAPA3G PCR Mix表現(xiàn)出的PCR擴增成功率。此外，該酶包含一定比例的RAPA HiFi超保真DNA聚合酶，因此其具有一定的保真性能（經(jīng)藍白斑測試，其保真性能約為Taq DNA聚合酶的56倍）。另外，RAPA3G系列產(chǎn)品均采用HaiG專有的熱啟動技術(shù)，確保50°C以下無活性，僅有95°C加熱5min以后才能恢復(fù)其活性，因此可限度的提高擴增的特異性，減少非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。該PCR Mix具有5'-3'的聚合酶活性、5'-3'的外切酶活性和3'-5'的外切酶活性，產(chǎn)物部分帶有"A"尾巴，部分為平末端，因此產(chǎn)物均可用于TA克隆或平端克隆。

特征和用途

快速擴增：具有6kb/min的擴增能力，1kb片段可在25min內(nèi)完成擴增.
高成功率擴增：RAPA3G PCR Mix具有的PCR擴增成功率。
液體樣品直接擴增：全血、血清、培養(yǎng)細胞、尿液等樣本直接進行PCR擴增，無需核酸純化。
組織樣本直接擴增：葉片、種子、果實、動物組織等樣品，可以直接擴增，也可采用DNA釋放劑簡單處理后直接擴增，無需核酸純化。
長片段擴增：質(zhì)粒、λ DNA 等簡單模板可以有效擴增>20 kb，基因組可以有效擴增>8 kb，cDNA可以有效擴增>8kb。
高保真擴增：保真度是 Taq DNA Polymerase 的56 倍。
高特異性：采用專有熱啟動技術(shù)，50°C以下無活性，僅有95°C加熱5min才能恢復(fù)酶活。

RAPA3G DNA聚合酶對抑制物耐受性

SDS	0.01%	胍鹽	0.25%
乙醇	5%	全血	15%
肝素	0.1IU/ml	血清	15%
Trizol	0.5%	血漿	2%
血紅蛋白	30μM	尿液	5%

50μl體積建議添加的樣品量

抗凝全血	2.5 μl	培養(yǎng)細胞	>100個
血清	2.5 μl	組織	0.1mg
尿液	2.5 μl	毛發(fā)囊	1-3個
血漿	1 μl	gDNA	1-400ng
植物葉片	2mm	cDNA	1-400ng
植物粗提物	2-4 μl	質(zhì)粒	0.1-10ng

儲存

長期儲存置于-20°C以下，可保存2年，避免反復(fù)凍融；短期使用置于4°C（3個月）保存，一經(jīng)融化后請放置于4°C，勿再凍存。

反應(yīng)實例

1. 模板適應(yīng)性強，長片段和短片段都可有效擴增

Lane 1：λDNA 500bp, 2：λDNA 1kb, 3：λDNA 2kb, 4：λDNA 5kb, 5：λDNA 8kb, 6：λDNA 15kb, 7：λDNA 20kb, 8：human 500bp ,9：human 1kb, 10：human 2kb ,11：human 5kb, 12：human 8kb, 13：cDNA 166bp, 14：cDNA 552bp, 15：cDNA 960bp, 16：cDNA 1574bp, 17：cDNA 1705bp, 18：cDNA 2755b,p 19：cDNA 4128bp, 20：cDNA 7600bp, M：DNA Marker 10000

選取三種DNA模板，使用RAPA3G PCR Mix進行擴增，循環(huán)數(shù)統(tǒng)一為28 cycles，結(jié)果如上圖所示，對于不同種類DNA模板和不同長度的靶基因，RAPA3G PCR Mix均有良好的擴增性能。

2. 對于粗制樣品DNA具有的耐受性

分別以人全血、血清、葉片粗制品DNA以及大豆種子粗制品DNA為模板，使用RAPA3G PCR Mix進行PCR擴增，結(jié)果如上圖展示，各種粗制樣品都有良好的擴增，其中全血和血清可耐受15%。

3.擴增靈敏度高，λDNA模板低至0.1pg也可以有效擴增

以λDNA為模板，選取不同模板使用量，采用RAPA3G PCR Mix進行擴增2kb靶基因，循環(huán)數(shù)統(tǒng)一為28 cycles，結(jié)果如上圖所示，λDNA模板低至0.1pg也可以有效擴增

2XRAPA3GPCR Mix(with dye)

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

2XRAPA3GPCR Mix(with dye)

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達量很低）。選擇隨機引物時，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應(yīng)時設(shè)計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長片段、全長產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進行設(shè)計。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優(yōu)化。

2XRAPA3GPCR Mix(with dye)

異尖線蟲屬PCR試劑盒	豬腸病毒RT-PCR試劑盒
山茱萸染料法PCR鑒定試劑盒	同牛皰疹病毒型牛巨細胞病毒PCR檢測試劑盒
嵌合蛋白1ELISA試劑盒	熊峽谷病毒PCR檢測試劑盒
白介su1εELISA試劑盒	奔馬赭霉PCR試劑盒
雞敗血支原體PCR檢測試劑盒	豬腸道杯狀病毒RT-PCR試劑盒
腐敗希瓦菌PCR檢測試劑盒	豬鏈球菌PCR檢測試劑盒
金黃地鼠白血病病毒RT-PCR試劑盒	阪崎腸桿菌rpsU-dnaG 基因熒光PCR檢測試劑盒間序列(探針法）
人腺病毒B7型PCR試劑盒	棒桿菌通用PCR檢測試劑盒
乳suan桿菌(LB)核suan檢測試劑盒	豬鏈球菌PCR檢測試劑盒
巨細胞病毒PCR檢測試劑盒	牛鼻炎病毒通用PCR檢測試劑盒
巨細胞病毒PCR試劑盒	乙型肝炎病毒核心抗體IgGELISA試劑盒
肉毒桿菌F型（CB-F）核suan檢測試劑盒	Anoctamin10蛋白ELISA試劑盒
解脲支原體PCR檢測試劑盒	腺苷高半水解meiELISA試劑盒
甲胎蛋白異質(zhì)體L1ELISA試劑盒	2XRAPA3GPCR Mix(with dye)APEX核suanmei2ELISA試劑盒
胺甲基四氫葉suan環(huán)化脫氫meiELISA試劑盒	Calicin蛋白ELISA試劑盒