50bp Ladder （for PAGE）分子量標準

濃度： 50ng/5μl
保存條件：融化后于4℃保存，-20℃保存。
產(chǎn)品說明：
本公司生產(chǎn)的DNA Marker均通過酶切質(zhì)粒得到，該工藝生產(chǎn)的Marker背景干凈、條帶清晰，質(zhì)量穩(wěn)定且能實現(xiàn)對Marker精確定量。產(chǎn)品含有兩種染料（二甲苯青加溴酚藍）。
本產(chǎn)品為即用型產(chǎn)品，已含有1xLoading Buffer，可根據(jù)實驗需要，直接取適量Marker進行電泳。
50 bp Ladder(for PAGE)由9條DNA條帶組成，DNA條帶分別為：100bp、150bp、 200bp 、250bp、300bp、 400bp 、500bp 、600bp 、700bp。
銀染方法：
一般加5μl跑電泳，根據(jù)膠孔大小可適當(dāng)增加或減少上樣量。
1.6% PAGE電泳。
2.卸膠到一個干凈的平皿中。
3.用水沖三次，倒掉。
4.加入0.1% 硝酸染色，在脫色搖床上搖10-15分鐘。
5.倒掉硝酸溶液，用水洗3次。
6.加入新鮮配制的顯色劑（1.2%氫氧化鈉）。
7.待條帶出現(xiàn)，立刻倒掉顯色劑，大量水沖洗，終止反應(yīng)。
8.盡快拍照記錄結(jié)果。
注意:
1.盡量用純度高水。
2.不要用手接觸膠，應(yīng)帶PE手套。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達量很低）。選擇隨機引物時，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應(yīng)時設(shè)計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長片段、全長產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結(jié)合目標RNA的已知序列進行設(shè)計。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優(yōu)化。