鏈霉親和素磁珠

是一種高度均勻的超順磁性微球，表面包覆著高密度的超純鏈霉親和素（＞97%）。微球經(jīng)過專門設(shè)計、測試和質(zhì)量控制，可用于免疫沉淀、細(xì)胞分選、快速單步捕獲生物su化分子，如 DNA、RNA、抗體或細(xì)胞裂解物或雜交反應(yīng)中的蛋白質(zhì)等。鏈霉親和素（或抗生素多倍體）和生物su之間的相互作用表現(xiàn)出已知的高非共價相互作用之一。抗生物su、鏈霉親和素、單體抗生物su及其類似物已成為探針和親和配體的有力工具，在生化分析、診斷、親和純化和藥物傳遞等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。鏈霉親和素是一種四聚體生物su結(jié)合蛋白，源于鏈霉菌親和素 II，質(zhì)量為 60000 道爾頓。鏈霉親和素不含碳水化合物，pI 較低，非特異性結(jié)合程度較低，使鏈霉親和素成為許多檢測系統(tǒng)的理想試劑選擇。

產(chǎn)品特點(diǎn): 使用鏈霉親和素-生物su結(jié)合系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)和益處：

·親和力：鏈霉親和素是同源四聚體，具有較高的生物su結(jié)合親和力，具有KD~10?14 米。

·高穩(wěn)定性：生物su結(jié)合復(fù)合物具有優(yōu)異的穩(wěn)定性，可抵抗 pH、溫度（2°C 和40°C）、苛刻的有機(jī)溶劑、變性劑（如氯化胍）、洗滌劑（如 SDS）和蛋白水解酶。

·突出的選擇性和特異性：生物su和鏈霉親和素的相互作用具有高度的特異性，確保了較低的非特異性結(jié)合。

·高靈敏度：高穩(wěn)定性和特異性確保了高檢測靈敏度。

·非常靈活：生物su的小尺寸和顯著穩(wěn)定性被證明非常適合相對容易地并入各種分子，例如合成聚合物、熒光團(tuán)、小分子或生物分子中的特定位置，從而對共軛生物分子的結(jié)構(gòu)和功能施加小的擾動。

鏈霉親和素磁性微球的優(yōu)點(diǎn)：

·快速、簡單且一步到位的高通量程序：消除了柱狀物或過濾器，或重復(fù)費(fèi)力的移液或 離心（圖 1） ·高結(jié)合能力 ·表現(xiàn)出較低的非特異性結(jié)合 ·可擴(kuò)展-可輕松調(diào)整樣本大小和自動化

所需材料 ·

Binding Buffer: 1x PBS, 0.1% BSA, pH 7.4 ·磁力分離器（適用于手動操作）： 根據(jù)實(shí)驗(yàn)時生物樣品的體積，使用者可以選擇以下不同型號的磁力分離器： 8孔磁力架 可以容納8個單獨(dú)的1.5-2.0 ml 離心管 ; 24孔磁力架可以容納24個單獨(dú)的1.5-2.0 ml離心管; 4孔磁力-15可以容納 4個單獨(dú)的15ml離心管; 4孔磁力架-50可以容納四個單獨(dú)的50 ml離心 管。

操作過程：

注: · 該方案是一種通用親和純化程序。為了獲得結(jié)果，每個用戶應(yīng)確定純化單個目標(biāo)蛋白的工作條件。

·根據(jù)粗樣品中目標(biāo)生物su化分子的數(shù)量（基于珠子結(jié)合能力），優(yōu)化每種應(yīng)用中使用的珠子數(shù)量。使用過多的磁珠會導(dǎo)致背景較高，而使用過少的磁珠會導(dǎo)致產(chǎn)量較低。

1. 將量的珠子轉(zhuǎn)移到離心管中。將管放在磁力架上1-3分鐘。在管留在分離器上的同時去除上清液。

2. 取下試管，用5倍體積的 1x Binding/Washing Buffer通過渦流清洗珠子30秒。將試管置于室溫下1-3分鐘。將管放在磁力架上1-3分鐘。在管留在分離器上的同時去除上清液。

3. 重復(fù)步驟二兩次。

向含有目標(biāo)分子的粗樣品中加入洗滌過的珠子，并在室溫或所需溫度下培養(yǎng)1-2小時（溫度越低，培養(yǎng)時間越長）。

注: 強(qiáng)烈建議進(jìn)行滴定以優(yōu)化培養(yǎng)時間。更長時間的孵育可能導(dǎo)致更高的背景。

4. 如步驟 2 所述清洗磁珠，直到 280 nm 處洗脫液的吸光度接近背景水平（OD280<0.05）。

注: 添加更高濃度的鹽、非離子洗滌劑和還原劑可降低非特異性背景。例如，向洗滌緩沖液中添加NaCl（高達(dá)1-1.5 M）、0.1-0.5%的非離子洗滌劑，如Triton X 100或吐溫20。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進(jìn)行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機(jī)引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機(jī)引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達(dá)量很低）。選擇隨機(jī)引物時，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)時設(shè)計引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。同時要注意隨機(jī)引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量超過250ng，可能會導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長片段、全長產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補(bǔ)的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進(jìn)行設(shè)計。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。