Protein G Magnetic Beads蛋白G磁珠

Protein G Magnetic Beads 是大小均勻，具有分散度的，表面共價(jià)綴合超純（純度>97％）的重組蛋白 G 的二氧化硅基質(zhì)超順磁珠。這種磁珠是經(jīng)過專門設(shè)計(jì)，并經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)量管理檢測(cè)的，主要用于當(dāng)使用的一級(jí)抗體確定時(shí)，用于免疫沉淀和細(xì)胞分選。 同時(shí)，也被廣泛用于從血清樣品，腹水，血漿或組織培養(yǎng)上清中快速和有效的一步純化多個(gè)種類的IgG 蛋白。表1總結(jié)了本磁珠的結(jié)合親和力和特異性。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

·適用于快捷，簡(jiǎn)便的一步高通量程序;無需純化柱或過濾器，或者重復(fù)的移液或離心(Fig.1) ·由于磁珠的親水性表面，非特異性結(jié)合率極低

·結(jié)合容量

·對(duì)樣本體積要求低，便于自動(dòng)化操作

·性價(jià)比高

產(chǎn)品屬性：

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緩沖液成分：

·.Protein G Beads (懸浮在 10 mM Tris, 0.15 M NaCl, 0.1% BSA,1 mM EDTA, pH7.4, 0.1% NaN3 緩沖液中) ·1x Protein G Binding/Washing Buffer (57.7 mM Na2HPO4,42.3 mM NaH2PO4, pH 7.0) ·1x Protein G Elution Buffer (0.2 M Glycine/HCl,pH 2.5) ·1x Protein G Neutralization Buffer (1.0 M Tris-HCl, pH 9.0)

所需耗材：

磁力分離器（適用于手動(dòng)操作）：根據(jù)實(shí)驗(yàn)時(shí)生物樣品的體積，使用者可以選擇以下不同型號(hào)的磁力分離器：8 孔磁力架可以容納 8 個(gè)單獨(dú)的 1.5-2.0 ml離心管; 24 孔磁力架可以容納 24 個(gè)單獨(dú)的 1.5-2.0 ml 離心管; 4 孔磁力-15 可以容納4 個(gè)單獨(dú)的15ml 離心管; 4 孔磁力架-50 可以容納四個(gè)單獨(dú)的 50 ml 離心管。

操作過程: 此過程可被等比例放大或縮小

提示：

1. 該方案是經(jīng)過優(yōu)化的，可用于純化來自不同來源的大多數(shù)IgG抗體。然而， 由于沒有兩種抗體相同，因此不可能為所有IgG純化設(shè)計(jì)一個(gè)通用試劑 盒。為了獲得結(jié)果，每個(gè)用戶必須根據(jù)故障排除部分中的建議，確定純 化單個(gè)抗體時(shí)的工作條件，尤其是弱結(jié)合抗體（見表1）。

2. 為確保離子強(qiáng)度和pH值的結(jié)合條件，有必要在純化前用Binding/ Washingbuffer按照至少1:1比例稀釋血清樣品、腹水或組織培養(yǎng)物。通 過離心或 0.2μ m過濾器過濾，去除樣品中的任何不溶性物質(zhì)。

3. 在純化IgG之前，用戶應(yīng)將試劑盒中包含的所有試劑平衡至室溫。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時(shí)，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長(zhǎng)鏈甚至全長(zhǎng)mRNA的RT，對(duì)RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進(jìn)行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機(jī)引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機(jī)引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個(gè)gene表達(dá)量很低）。選擇隨機(jī)引物時(shí)，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。同時(shí)要注意隨機(jī)引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量超過250ng，可能會(huì)導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長(zhǎng)片段、全長(zhǎng)產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個(gè)基因序列的一部分，與模板互補(bǔ)的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個(gè)目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時(shí)，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對(duì)退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。