RNAfixer 無(wú)液氮 RNA 樣品儲(chǔ)存液

保存條件：

室溫(18-25℃)保存1 年以上，如果使用時(shí)發(fā)現(xiàn)有沉淀或者析出，可以37℃水浴加熱重新溶解后使用，重新溶解后不會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量。
產(chǎn)品介紹：
RNAfixer 是一種液態(tài)的無(wú)毒的組織保存液體，可以迅速滲入新鮮組織細(xì)胞的胞漿中，在非凍狀態(tài)下原位穩(wěn)定和保護(hù)細(xì)胞內(nèi)的RNA。取下組織薄片后立刻浸入RNAfixer 保存并不影響將來(lái)提取RNA 的質(zhì)量和數(shù)量。RNAfixer 消除了RNA 樣品需要立刻處理或者必須液氮保存的不方便。浸入RNAfixer 后，新鮮組織細(xì)胞中RNA 可以完好的在37℃下保存一天，在25℃下保存一周，4℃下保存一個(gè)月，在-20℃或-80℃下長(zhǎng)期保存。
RNA 病毒樣品(如HCV 和HIV)可在37℃保存一個(gè)月。適用于動(dòng)物組織（心、肝、腎、肌肉、睪丸、腦、脾等）、培養(yǎng)細(xì)胞、RNA 病毒、 果蠅、細(xì)菌、白細(xì)胞、一些植物組織等。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.操作容易：將組織成適當(dāng)大小，浸沒在RNAfixer 中即可使其RNA 不被降解。
2.無(wú)需液氮：使樣品的保存不需液氮,干冰或-80℃冰箱,尤其適用于臨床和野外樣品的快速和大規(guī)模采集。
3.方便運(yùn)輸：處理過(guò)的樣品能在25℃保存一周,使樣品郵寄和運(yùn)輸變得容易和便宜,有利學(xué)術(shù)合作和交流。
4.多次凍融: 經(jīng)RNAfixer 處理的樣品可反復(fù)凍融多次, 其間可對(duì)樣品進(jìn)行各種處理而不影響最終提取的RNA 的質(zhì)量。
5.可比性強(qiáng): RNAfixer 能減少大規(guī)模樣品處理中的誤差,增加各次實(shí)驗(yàn)數(shù)間的可比性, 對(duì)大規(guī)?；虮磉_(dá)譜的分析尤其有用。
使用說(shuō)明：
RNAfixer 只用于新鮮組織，浸泡入 RNAfixer 前禁止冷凍組織。只需要迅速將新鮮組織成長(zhǎng)、寬，高任意一邊厚度<0.5 厘米浸泡入 RNAfixer 即可（只要有一邊厚度不超過(guò) 0.5 厘米，RNAfixer 可以迅速滲透，其它兩邊的尺寸并不重要）。將新鮮組織浸泡 在 5 倍體積的 RNAfixer 中，按照指示存放在適當(dāng)?shù)臏囟取?/span>
1.動(dòng)物組織 RNAfixer 并不破壞或者溶解組織結(jié)構(gòu)，因此浸泡在 RNAfixer 中達(dá)到滲透平衡的組織 可以從 RNAfixer 中取出，然后切成更小的塊，然后放回到 RNAfixer 中下次繼續(xù)使用。小器官如小鼠肝、腎、脾不需要剪切,可以完整的存放在 RNAfixer 中。
推薦不同組織樣品的 RNAstore 使用量：

2.植物組織很多植物組織直接浸泡入 RNAfixer 即可，有的植物有天然滲透屏障如臘質(zhì)保護(hù)層，需要先破壞掉臘質(zhì)層,便于 RNAfixer 滲透。
3.組織培養(yǎng)細(xì)胞細(xì)胞吹打下來(lái)后,離心收集細(xì)胞,棄上清，用冰浴的 PBS 緩沖液洗一次去除殘留培養(yǎng)液。將細(xì)胞懸浮在少量 PBS 緩沖液中。加入五到十倍體積 RNAfixer, 混均。
4.白細(xì)胞對(duì)于全血中白細(xì)胞的保存，需將白細(xì)胞從紅細(xì)胞和血清中分離出來(lái)，并按組織培養(yǎng)細(xì)胞一樣處理后，白細(xì)胞便能有效地保存在 RNAfixer 中。不要將全血、血漿或血清中的 RNA 保存在 RNAfixer 中，因?yàn)樗鼈兊鞍缀窟^(guò)高，與 RNAfixer 混合后易形成不溶的沉淀。
5.細(xì)菌
細(xì)菌并不能在 RNAfixer 中生長(zhǎng)，但是 RNAfixer 并不破壞細(xì)菌，E. coli 在 4℃保存一個(gè)月仍舊可以提出完整的 RNA。
RNAfixer 中樣本的存放：
1.存放在-80℃樣品長(zhǎng)期保存用。將 RNA fixer 中樣本放置于 4℃過(guò)夜，然后將樣本撈出，盡量去除干凈 RNAfixer 液體，然后放置于-80℃。對(duì)于組織培養(yǎng)細(xì)胞，則不需要去除RNAfixer，直接冷凍于-80℃，并不會(huì)裂解細(xì)胞。樣品使用時(shí)可以在室溫融化，并且還可以再次冷凍而不影響 RNA 的完整性和產(chǎn)量。
2.存放在-20℃將 RNAfixer 中樣本放置于 4℃過(guò)夜，然后轉(zhuǎn)移到-20℃。在-20℃樣品并不會(huì)被冰凍,但是可能會(huì)形成一些結(jié)晶，這并不會(huì)影響將來(lái)的 RNA 提取。樣品使用時(shí)可以在室溫 融化，并且還可以再次冷凍而不影響 RNA 的完整性和產(chǎn)量。
3.存放在 4℃樣本可以在 4℃存放一個(gè)月。
4.存放于 25℃存放于 25℃樣本的 RNA 在一周內(nèi)保持完整，保存兩周的樣品 RNA 有輕微降解，勉強(qiáng)能用于northern analysis, 但是質(zhì)量足夠用于nuclease protection assay or RT-PCR 。
5.存放于 37℃存放于 37℃樣本的 RNA 在 24 小時(shí)內(nèi)保持完整，3 天的時(shí)候有部分降解。RNAfixer 保存樣本的 RNA 提?。?/span>將樣本從 RNAfixer 中取出,RNAfixer 可以直接倒入水池，用自來(lái)水沖即可，不需特殊處理。
1.組織
用干凈鑷子將樣本從 RNAfixer 中撈出，用吸水紙稍稍吸去殘留的 RNAfixer 后，可以和新鮮組織一樣按照液氮研磨，然后勻漿處理的標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行提取 RNA。
2.細(xì)胞
對(duì)于儲(chǔ)存在 RNAfixer 中的細(xì)胞有兩種選擇。一是去除 RNAfixer 后提取 RNA, 另一個(gè)是直接從細(xì)胞和 RNAfixer 的混合物提取。
1）去除 RNAfixer 后提取 RNA存放于 RNAfixer 中的細(xì)胞變得不那么脆弱，可以承受較高的離心速度而不被裂解。 我們有在 5000g 離心成功收集細(xì)胞的經(jīng)驗(yàn)，由于每種細(xì)胞的強(qiáng)度不一樣，可以先用不重要的細(xì)胞做個(gè)預(yù)試驗(yàn)，以保證在使用的速度下離心不會(huì)破壞細(xì)胞。另一個(gè)選擇是在離心前加等體積的 PBS 稀釋 RNAfixer 和細(xì)胞的混合物，以減少溶液的密度，使細(xì)胞溶液可以沉淀下來(lái)。
2）不去除 RNAfixer，直接提取 RNA
也可以直接加 10 倍體積的一步法提取試劑（如 TRIpure，TRI reagent）到細(xì)胞和RNAfixer 的混合物，然后按照正常步驟操作。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過(guò)程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過(guò)程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來(lái)判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時(shí)，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長(zhǎng)鏈甚至全長(zhǎng)mRNA的RT，對(duì)RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進(jìn)行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機(jī)引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機(jī)引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個(gè)gene表達(dá)量很低）。選擇隨機(jī)引物時(shí)，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。同時(shí)要注意隨機(jī)引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量超過(guò)250ng，可能會(huì)導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長(zhǎng)片段、全長(zhǎng)產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個(gè)基因序列的一部分，與模板互補(bǔ)的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個(gè)目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時(shí)，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來(lái)就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對(duì)退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。