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豬偽狂犬gE鑒別ELISA診斷試劑盒使用說明書

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 豬偽狂犬gE鑒別ELISA診斷試劑盒使用說明書

 

【用途】

豬偽狂犬病毒gE鑒別ELISA診斷試劑盒用于檢測(cè)豬血清中抗偽狂犬病毒gE蛋白的抗體。用于區(qū)別臨床野毒感染豬和用gE基因缺失疫苗免疫的豬。

【簡(jiǎn)介】

試劑盒由抗原包被的微孔板,酶標(biāo)羊抗豬IgG及其它試劑制成,應(yīng)用間接ELISA原理檢測(cè)豬血清中抗偽狂犬病毒gE蛋白的抗體。

【原理】

本試劑盒是采用豬偽狂犬病毒gE基因的工程表達(dá)產(chǎn)物包被微孔板,在試驗(yàn)中,按操作步驟加入對(duì)照血清和待檢血清,經(jīng)溫育后,若樣品中含有抗豬偽狂犬病毒gE蛋白的特異性抗體,則將與檢測(cè)板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;再加入酶標(biāo)二抗,與檢測(cè)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,在孔中加TMB底物液,與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,加入H2SO4溶液終止反應(yīng)后,用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的OD,建議用雙波長(zhǎng)檢測(cè)(450nm、630nm)。

【試劑盒主要成分】

1、

包被抗原的微孔板

2

96/塊)

2、

陰(綠蓋)、陽(紅蓋)性對(duì)照血清

1

1ml/管)

3、

抗豬IgG-HRP結(jié)合物 (黃蓋)

1 

22ml/瓶)

4、

20倍濃縮洗滌液 (白蓋)

1

30ml/瓶)

5、

底物A(紫蓋)液、B(黃蓋)液

1

12ml/瓶)

6、

終止液 (藍(lán)蓋)

1

12ml/瓶)

7、

樣品稀釋液透明蓋

1

50ml/瓶)

8

說明書

 

1

【用前制備】

仔細(xì)閱讀說明書,所有試劑在4℃條件下保存,禁止結(jié)冰,如果干燥帶發(fā)紅不能使用,不用的孔必須密封好以防潮濕對(duì)平板有害,不要是平板接觸強(qiáng)光和氧化物。不要使用過期的成分或混合使用成分。注意加樣和沖洗,以確保試驗(yàn)的度和準(zhǔn)確度。操作過程中注意安全,要帶手套,終止液含有硫酸使用要小心。所有的廢液要經(jīng)過處理和凈化。

【未提供的需用材料】

微量加樣器、加液槽、蒸餾水、恒溫箱、酶標(biāo)儀、吸水紙

【注意事項(xiàng)】

1、試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫。

2、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用。

3、注意防止試劑盒各組分受污染。

4、微孔板拆封后避免受潮或沾水每次將剩余的微孔板用封口袋扎緊后盡快置于4。

【試劑配制】

洗滌液:用蒸餾水稀釋20濃縮洗滌液,混勻。

【操作步驟】

1、  取預(yù)包被的微孔板(根據(jù)樣品多少,可拆開分次使用),用樣品稀釋液將待檢樣品40稀釋后加入板孔中,每孔加100μl。陰、陽性對(duì)照(陰、陽性對(duì)照不稀釋)各設(shè)2孔,每孔100μl。另設(shè)一空白對(duì)照孔,空白對(duì)照孔加100μl稀釋液。輕輕振勻孔中樣品(勿溢出),置37溫育30min。

2、  甩掉板孔中的溶液,用洗滌液洗板5次,300μl/孔,每次靜置60秒倒掉,zui后一次在不掉屑干凈吸水紙上拍干。

3、  每孔加酶標(biāo)二抗(抗豬IgG-HRP結(jié)合物)100μl,置37溫育30min。

4、  洗滌5次,方法同2。

5、  每孔加底物A液、B液各50μl,混勻,37℃避光顯色10分鐘。

6、  每孔加終止液50μl,混勻,置酶標(biāo)儀450nm處測(cè)各孔OD值(建議用雙波長(zhǎng)450nm630nm)。10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。

【結(jié)果判定】 

1、  陰性對(duì)照:正常情況下,陰性對(duì)照孔OD450≤0.1;

2、  陽性對(duì)照:正常情況下,陽性對(duì)照孔OD450≥0.4;

3、  臨界值(C.O.)的計(jì)算:臨界值=0.15+陰性對(duì)照孔均值;所有陰性、陽性對(duì)照和樣品的OD450值均須減去空白平均值后作為計(jì)算值;陰性對(duì)照孔OD450值大于0.10時(shí)應(yīng)舍棄,如所有陰性對(duì)照孔OD450值都大于0.10時(shí)須重復(fù)實(shí)驗(yàn);陰性對(duì)照孔低于0.05時(shí)以0.05計(jì)算。

4、  結(jié)果判定:檢測(cè)標(biāo)本OD450臨界值判定為本試驗(yàn)陽性;檢測(cè)標(biāo)本OD450值<臨界值判定為陰性。

【規(guī)格】 96×2   

【有效期】12個(gè)月  

【貯存】 2-8℃避光保存  

【生產(chǎn)日期】 見試劑盒外包裝

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