豬偽狂犬gE鑒別ELISA診斷試劑盒使用說明書

【用途】

豬偽狂犬病毒gE鑒別ELISA診斷試劑盒用于檢測(cè)豬血清中抗偽狂犬病毒gE蛋白的抗體。用于區(qū)別臨床野毒感染豬和用gE基因缺失疫苗免疫的豬。

【簡(jiǎn)介】

試劑盒由抗原包被的微孔板，酶標(biāo)羊抗豬IgG及其它試劑制成，應(yīng)用間接ELISA原理檢測(cè)豬血清中抗偽狂犬病毒gE蛋白的抗體。

【原理】

本試劑盒是采用豬偽狂犬病毒gE基因的工程表達(dá)產(chǎn)物包被微孔板，在試驗(yàn)中，按操作步驟加入對(duì)照血清和待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有抗豬偽狂犬病毒gE蛋白的特異性抗體，則將與檢測(cè)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)二抗，與檢測(cè)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，加入H₂SO₄溶液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的OD值,建議用雙波長(zhǎng)檢測(cè)（450nm、630nm）。

【試劑盒主要成分】

【用前制備】

仔細(xì)閱讀說明書，所有試劑在4℃條件下保存，禁止結(jié)冰，如果干燥帶發(fā)紅不能使用，不用的孔必須密封好以防潮濕對(duì)平板有害，不要是平板接觸強(qiáng)光和氧化物。不要使用過期的成分或混合使用成分。注意加樣和沖洗，以確保試驗(yàn)的度和準(zhǔn)確度。操作過程中注意安全，要帶手套，終止液含有硫酸使用要小心。所有的廢液要經(jīng)過處理和凈化。

【未提供的需用材料】

微量加樣器、加液槽、蒸餾水、恒溫箱、酶標(biāo)儀、吸水紙

【注意事項(xiàng)】

1、試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫。

2、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用。

3、注意防止試劑盒各組分受污染。

4、微孔板拆封后避免受潮或沾水（每次將剩余的微孔板用封口袋扎緊后盡快置于4℃）。

【試劑配制】

洗滌液：用蒸餾水稀釋20倍濃縮洗滌液，混勻。

【操作步驟】

1、  取預(yù)包被的微孔板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用），用樣品稀釋液將待檢樣品40倍稀釋后加入板孔中，每孔加100μl。陰、陽性對(duì)照（陰、陽性對(duì)照不稀釋）各設(shè)2孔，每孔100μl。另設(shè)一空白對(duì)照孔，空白對(duì)照孔加100μl稀釋液。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37℃溫育30min。

2、  甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗板5次，300μl/孔，每次靜置60秒倒掉，zui后一次在不掉屑干凈吸水紙上拍干。

3、  每孔加酶標(biāo)二抗（抗豬IgG-HRP結(jié)合物）100μl，置37℃溫育30min。

4、  洗滌5次，方法同2。

5、  每孔加底物A液、B液各50μl，混勻，37℃避光顯色10分鐘。

6、  每孔加終止液50μl，混勻，置酶標(biāo)儀450nm處測(cè)各孔OD值（建議用雙波長(zhǎng)450nm、630nm）。10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。

【結(jié)果判定】 

1、  陰性對(duì)照：正常情況下，陰性對(duì)照孔OD₄₅₀值≤0.1；

2、  陽性對(duì)照：正常情況下，陽性對(duì)照孔OD₄₅₀值≥0.4；

3、  臨界值（C.O.）的計(jì)算：臨界值=0.15+陰性對(duì)照孔均值；所有陰性、陽性對(duì)照和樣品的OD₄₅₀值均須減去空白平均值后作為計(jì)算值；陰性對(duì)照孔OD₄₅₀值大于0.10時(shí)應(yīng)舍棄，如所有陰性對(duì)照孔OD₄₅₀值都大于0.10時(shí)須重復(fù)實(shí)驗(yàn)；陰性對(duì)照孔低于0.05時(shí)以0.05計(jì)算。

4、  結(jié)果判定：檢測(cè)標(biāo)本OD₄₅₀值≥臨界值判定為本試驗(yàn)陽性；檢測(cè)標(biāo)本OD₄₅₀值＜臨界值判定為陰性。

【規(guī)格】 96孔×2塊   

【有效期】12個(gè)月  

【貯存】 2-8℃避光保存  

【生產(chǎn)日期】 見試劑盒外包裝