鈣藍(lán)素,AM是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的細(xì)胞滲透性鈣黃綠素，它是鈣黃綠素的細(xì)胞滲透型。進(jìn)入活細(xì)胞后，弱熒光鈣黃綠素AM被水解成鈣黃綠素，其激發(fā)/發(fā)射大值與DAPI，Hoechst和AMCA相似。與典型的綠色和紅色熒光團(tuán)（如FITC，TMR和德克薩斯紅）的這種特殊光譜分離為多路復(fù)用實(shí)驗(yàn)提供了額外的選擇。因?yàn)殁}黃綠素AM本身是熒光的，所以可能需要適當(dāng)?shù)倪^(guò)濾器組和額外的洗滌步驟以使背景熒光小化。我們的鈣測(cè)定緩沖液可用于有效洗滌細(xì)胞外鈣黃綠素。

1. 百螢 鈣藍(lán)素AM 參數(shù)：

E x(nm)       354

E m(nm)       441

分 子 量      465.41

溶    劑     DMSO

存儲(chǔ)條件      在零下15度以下保存，避免光照

 C A S      168482-84-6

2. 百螢 鈣藍(lán)素AM適用儀器

流式細(xì)胞儀

Ex:     350nm or 405nm

Em:     450/40 nm

通道:   Pacific Blue通道

熒光顯微鏡

Ex:     DAPI濾波片組

Em:      DAPI濾波片組

推薦孔板:   黑色透明底板

熒光酶標(biāo)儀

Ex:          360nm

Em:          450 nm

Cutoff:      420nm

推薦孔板:    黑色透明底板

讀取模式:    底讀模式

3. 百螢 鈣藍(lán)素AM實(shí)驗(yàn)方案

操作步驟

（1）準(zhǔn)備HHBS緩沖液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。

（2）在高質(zhì)量無(wú)水DMSO中制備2 mM至5 mM Calcein Blue，AM * CAS 168482-84-6 *儲(chǔ)備液。
（2.1）卡介素藍(lán)量，AM * CAS 168482-84-6 *使用量：1毫克
（2.2）所需濃度：2 mM
（2.3）在合適的容器中，將1mg鈣黃綠素，AM * CAS 168482-84-6 *與1074.32μL無(wú)水DMSO混合。
 （3）用含有10μM鈣黃綠素的HHBS制備2X工作溶液，AM * CAS 168482-84-6 * 4，0.08％Pluronic®F-127和2 mM*磺舒。
（3.1）Calcein Blue的終孔內(nèi)濃度，AM * CAS 168482-84-6 *：5μM
（3.2）Pluronic®F-127的終孔內(nèi)濃度：0.04％
（3.3）終孔內(nèi)濃度的*磺舒：1mM
（3.4）在合適的容器中混合16μL鈣黃綠素，AM * CAS 168482-84-6 *，25.6μL10％Pluronic®F-127和256μL25mM Probenecid。然后，添加HHBS或您選擇的緩沖液，直到體積為3.2 mL。
注意：對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞系，我們建議終濃度為Calcein Blue，AM * CAS 168482-84-6 *為4至5μM。
注意：推薦的Pluronic F-127井濃度終為0.02％至0.04％。
注意：推薦的終濃度為1至2.5 mM的Probenecid。
 （4）將100μL染料工作溶液加入已經(jīng)含有100μL培養(yǎng)基的所需孔中。
（4.1）此步驟將染料工作溶液從2X稀釋至1X，并將每種組分的終濃度調(diào)整為以下：5μM鈣黃綠素，AM * CAS 168482-84-6 *，0.04％Pluronic®F-127,1 mM*磺舒。

 （5）孵育染料
（5.1）將染料加載板在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育20-60分鐘。
（5.2）將染料加載板在室溫下孵育30分鐘。
 （6）用1.0 mM Probenecid準(zhǔn)備HHBS緩沖液（或您選擇的緩沖液）。
在合適的容器中加入160μL的25mM*磺舒。 接下來(lái)，添加HHBS或您選擇的緩沖液，直到體積為4 mL。
 （7）用HHBS緩沖液或您選擇的緩沖液替換染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
（7.1）首先，從所需孔中除去200μL染料工作溶液和培養(yǎng)基。
（7.2）在相同的孔中加入200μL含有1.0mM*磺舒的HHBS（或您選擇的緩沖液）。
 （8）運(yùn)行實(shí)驗(yàn)
（8.1）為您的樣品添加所需的處理。
（8.2）以Ex / Em = 360/445 nm運(yùn)行實(shí)驗(yàn)。