高靈敏度熒光的DNA定量試劑盒針對CytoCite和Qubit熒光分析儀進行了優(yōu)化。DNA定量是用于各種基因組分析的DNA樣品制備中非常重要的。這種Portelite dsDNA定量試劑盒提供了一種使用手持式熒光分析儀使用Helixyte Green探針定量dsDNA的快速方法。它針對Cytocite 和Qubit 熒光計進行了優(yōu)化。 Portelite dsDNA定量分析線性超過五個數量級。該測定法對RNA上的雙鏈DNA（dsDNA）具有高度選擇性，并且設計為對于25pg / uL至100ng / uL的初始樣品濃度是準確的。 Helixyte Green在與dsDNA結合后表現(xiàn)出大的熒光增強，并且比UV吸光度讀數更敏感。

一．百螢DNA定量試劑盒適用儀器

量子位熒光計

Ex: 480nm

Em: 520nm

規(guī)格:0.2mL PCR小瓶

CytoCite熒光計

Ex: 480nm

Em: 520nm

規(guī)格:0.2mL PCR小瓶

二．百螢DNA定量試劑盒實驗方案

溶液制備

Helixyte Green 工作溶液制備：
為10個樣品制備足夠的工作溶液，將10μL Helixyte Green （組分A）加入2 mL DNA分析緩沖液（組分B）中。注意：用鋁箔覆蓋或將其置于黑暗中，以保護工作溶液免受光照。注意：我們建議將此溶液用塑料容器而不是玻璃制備，因為染料可能會吸附到玻璃表面。為獲得佳效果，該溶液應在其制備后幾小時內使用。

樣品實驗方案

樣品體積是1~20μL（取決于DNA樣品的估計濃度）。推薦樣品體積為10μL，DNA濃度范圍為0.5~10 ng /μL。如果使用其他樣品量，請在濃度計算中調整稀釋倍數。

1.基于10μL樣品體積生成以下方案，DNA濃度在0.5~10 ng /μL范圍內。

1.1在每個Cytocite 樣品管（＃CCT100）或等效的0.2 mL PCR管中加入190μL1XHelixyte Green 工作溶液注意：使用薄壁聚丙烯，透明的0.2 mL PCR管，如＃CCT100。

1.2將DNA標準品或測試樣品10μL加入每個試管中，然后渦旋混合2~3秒。

1.3讓所有試管在室溫下孵育2分鐘。

1.4將樣品插入CytoCite 或Quibit ，并用綠色熒光通道監(jiān)測熒光。按照適用于CytoCite 熒光分析儀的步驟進行操作。

2.標準校準曲線的制備

對于Portelite 分析，您可以選擇使用DNA標準制作校準曲線。以下是生成定制DNA標準曲線的簡要方案：

2.1用DNA Assay Buffer進行稀釋，得到10,8,6,4,2,1,0.5,0 ng /μLDNA標準稀釋液。

2.2將190μLHelixyteGreen 工作溶液加入0.2 mL PCR管中。

2.3每管加入10μL標準品或10μL樣品。

2.4在室溫下孵育反應2分鐘。

2.5將樣品插入CytoCite 并用綠色熒光通道檢測熒光。

數據分析

從空白標準孔獲得的讀數（RFU）用作陰性對照。從其他標準的讀數中減去該值，以獲得基線校正值。然后，繪制標準讀數以獲得標準曲線和方程。該等式可用于計算濃度樣本。

圖1.使用Portelite 熒光DNA高靈敏度定量試劑盒生成的DNA標準曲線。使用FITC通道定量熒光強度，使用log-log best-fit計算回歸模型。檢測限為10 pg /μL。

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百螢課堂之DNA定量試劑盒的實驗方案

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