Portelite 熒光 ssDNA 定量試劑盒用于快速檢測單鏈 DNA。該試劑盒包含所有基本試劑，包括 Helixyte Green ssDNA 試劑、稀釋緩沖液和預(yù)稀釋的 DNA 標準品。 Helixyte Green ssDNA 試劑是一種靈敏的熒光核酸探針，用于定量溶液中的寡核苷酸和單鏈 DNA (ssDNA)。只需使用提供的緩沖液稀釋試劑，添加樣品（可接受 1–20 μL 的任何體積），然后使用 CytoCite、Qubit® 或其他手持或臺式熒光計（Qubit® 是 ThermoFisher 的商標）讀取濃度。該檢測對于 50 pg/µL 至 200 ng/µL 的初始樣品濃度是準確的，提供了 1–200 ng 的測定范圍。

量子位熒光計

Ex: 480 nm

Em： 530 nm

規(guī)格: 0.2 mL PCR 小瓶

CytoCite 熒光計

Ex: 480 nm

Em： 530 nm

規(guī)格: 0.2 mL PCR小瓶

實驗方案

概述

1.準備 Helixyte Green ssDNA 工作溶液

2.在每個 0.2 mL PCR 管中加入 190 µL 1X Helixyte Green ssDNA 工作溶液

3.在每個管中加入 10 µL ssDNA 標準品或測試樣品

4.在室溫下孵育2分鐘

5.使用 CytoCite 熒光計或 Qubit 熒光計檢測熒光強度

溶液制備F

Helixyte Green ssDNA 工作溶液

使用檢測緩沖液（組分 B）將 Helixyte Green ssDNA 試劑（組分 A）稀釋 200 倍。例如，要為 5 個樣品制備足夠的工作溶液，將 5 μL Helixyte Green ssDNA（組分 A）添加到 1 mL 檢測緩沖液（組分 B）中。

注意：通過用箔紙覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵衼肀Ｗo工作溶液免受光照。建議在塑料容器而不是玻璃容器中制備溶液，因為染料可能會吸附到玻璃表面。為獲得佳效果，該溶液應(yīng)在稀釋后幾小時內(nèi)使用。

操作步驟

樣品體積的可接受范圍是 1~20 μL，這具體取決于核酸樣品的估計濃度。

以下實驗方案基于 10 µL 樣品體積生成，DNA 濃度范圍為 20~1000 ng /mL。

1.將 190 µL 1X Helixyte Green ssDNA 工作溶液添加到每個 Cytocite 樣品管 (#CCT100) 或等效的 0.2 mL PCR 管中。

注意：使用薄壁、聚丙烯、透明的 0.2 mL PCR 管，例如 AAT Cat#CCT100。

2.在每管中加入 10 µL ssDNA 標準品或測試樣品，然后渦旋混合 2~3 秒。

3.在室溫下孵育所有管子 2 分鐘。

4.將樣品插入 CytoCite 或 Qubit 并使用綠色熒光通道檢測熒光。

標準校準曲線的制作

1.執(zhí)行 1:2 連續(xù)稀釋：將 10 ng/μL ssDNA Standard #2（組分 D）添加到檢測緩沖液（組分 B）中，以獲得 10、5、2.5、1.25、0.62、0.31、0.15 ng/μL DNA 標準稀釋度。

2.在每個管中加入 190 µL Helixyte Green ssDNA 工作溶液。

3.將 10 µL 標準品加入 0.2 mL PCR 管中，然后渦旋混合 2~3 秒。

4.在室溫下孵育反應(yīng) 2 分鐘。

5.將樣品插入 CytoCite 并使用綠色熒光通道檢測熒光強度。

圖示

圖 1. 使用 Qubit 熒光計（藍色）或 CytoCite 熒光計（紅色）比較 ssDNA 劑量反應(yīng)。

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