AAT Bioquest鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)是一種從毒蘑菇(如鵝膏菌屬)中提取的環(huán)肽毒素,因其生物學(xué)特性,在生命科學(xué)研究中具有重要應(yīng)用。
1. 高特異性結(jié)合F-肌動蛋白
靶向性強:選擇性結(jié)合細(xì)胞骨架中的F-肌動蛋白(微絲),幾乎不與其他蛋白相互作用,背景干擾極低。
穩(wěn)定結(jié)構(gòu):與肌動蛋白結(jié)合后,可防止其解聚,維持細(xì)胞骨架形態(tài),便于長期觀察。
2. 標(biāo)記能力好
熒光標(biāo)記兼容性:常與熒光染料(如FITC、TRITC、Alexa Fluor系列)偶聯(lián),實現(xiàn)高分辨率顯微成像(共聚焦、超分辨顯微鏡等)
低濃度有效:納摩爾級濃度即可清晰標(biāo)記,減少對細(xì)胞活性的影響。
3. 保持細(xì)胞活性(活細(xì)胞成像)
穿透性改良衍生物:如BODIPY-鬼筆環(huán)肽,可通過細(xì)胞膜進入活細(xì)胞,實現(xiàn)實時動態(tài)觀察(需優(yōu)化條件)。
4. 高穩(wěn)定性和信噪比
抗光漂白:部分衍生物(如Alexa Fluor偶聯(lián)物)耐光性強,適合長時間拍攝。
低背景噪聲:特異性結(jié)合減少非特異性信號,提升圖像質(zhì)量。
5. 廣泛應(yīng)用場景
細(xì)胞形態(tài)學(xué)研究:清晰顯示微絲分布(如偽足、應(yīng)力纖維)。
疾病機制:研究癌癥遷移、神經(jīng)突觸可塑性等。
藥物篩選:評估化合物對細(xì)胞骨架的影響。
6. 與其他技術(shù)的兼容性
可與抗體標(biāo)記(如微管蛋白、細(xì)胞器標(biāo)記)聯(lián)合使用,實現(xiàn)多色成像。
適用于3D細(xì)胞培養(yǎng)、組織切片等多種樣本類型。
注意事項
毒性:天然鬼筆環(huán)肽劇毒,需謹(jǐn)慎操作;熒光衍生物毒性較低。
活細(xì)胞應(yīng)用限制:需選擇透膜性衍生物,并優(yōu)化實驗條件。
圖1.Phalloidin-iFluor®488 Conjugate在熒光顯微鏡下使用FITC濾鏡(綠色)染色HeLa細(xì)胞的熒光圖像。將細(xì)胞固定在4%甲醛中,用線粒體染料MitoLite™Red FX600 (Cat#2677,紅色)和Nuclear Blue™DCS1 (Cat#17548,藍色)共同標(biāo)記。
圖2.用 4%甲醛固定 HeLa 細(xì)胞,接著用 Cell Navigator® F-肌動蛋白標(biāo)記試劑盒(紅色熒光)在 Costar 黑色 96 孔板中進行染色的熒光圖像。細(xì)胞分別用鬼筆環(huán)肽-iFluor® 594(貨號 23122,紅色)和細(xì)胞核染色劑 DAPI(貨號 17507,藍色)進行標(biāo)記。在固定前,細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)用 ER Green™(貨號 22635,綠色)進行染色。
AAT Bioquest鬼筆環(huán)肽憑借其高特異性、穩(wěn)定標(biāo)記能力和廣泛適用性,成為細(xì)胞骨架研究中的“金標(biāo)準(zhǔn)”工具。