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西安百螢生物科技有限公司
初級會(huì)員 | 第5年

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蛋白激酶
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抗體標(biāo)記
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染料標(biāo)記試劑
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二氨基乙烷鹽酸鹽
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酪胺
凝集素
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FAM
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AF染料

一種以微觀方式標(biāo)記抗體的試劑盒

時(shí)間:2021/11/19閱讀:281
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      ReadiLink 快速抗體標(biāo)記試劑盒提供了一種以微觀方式標(biāo)記抗體的便捷方法。 該試劑盒僅需要兩個(gè)簡單的混合步驟而無需純化步驟。試劑盒中使用的iFluor 和mFluor 染料的琥珀酰亞胺酯(SE)顯示出與蛋白質(zhì)的脂族胺的良好反應(yīng)性和選擇性,并形成羧酰胺鍵,其與天然肽鍵相同且穩(wěn)定。 iFluor 和mFluor-抗體綴合物可用于免疫熒光染色,熒光原位雜交,流式細(xì)胞術(shù)和其他生物學(xué)應(yīng)用。每個(gè)ReadiLink Rapid抗體標(biāo)記試劑盒都提供了進(jìn)行兩次偶聯(lián)反應(yīng)(2x50μg蛋白質(zhì))的所有必需成分。每個(gè)試劑盒可用于標(biāo)記50-100μg單克隆,多克隆抗體或其他蛋白質(zhì)(> 10 kDa),只需兩個(gè)簡單的混合步驟。

 Readilink 快速試劑盒標(biāo)記原理

1.通過在反應(yīng)緩沖液(pH 7.5-8.5)中將標(biāo)記染料與蛋白質(zhì)(待標(biāo)記的)混合,開始標(biāo)記反應(yīng)2.孵育得到所需蛋白質(zhì)綴合物和非反應(yīng)性游離染料的混合物。

3.通過將非熒光Tide Quencher (TQ)染料與反應(yīng)溶液混合來淬滅反應(yīng)。TQ染料阻止反應(yīng)并將非反應(yīng)性自由標(biāo)記染料轉(zhuǎn)化為非熒光TQ標(biāo)記染料復(fù)合物,這消除了游離標(biāo)記染料的背景熒光干擾。

 

試劑盒組成

組分

含量

儲(chǔ)存

組分 A:Mitolite Red

2 vial (one vial is for 50 ug protein)

—20℃

組分 B:Live Cell Staining Buffer

1 vial (20uL)

—20℃

組分 C:TQ -Dyed Quench Buffer

1 vial (20uL)

—20℃

 

標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(標(biāo)記50μg蛋白質(zhì))

將所有組分加熱并在打開前將樣品瓶短暫離心,并在開始結(jié)合前立即準(zhǔn)備所需的溶液。 以下SOP是標(biāo)記抗HDAC IgG抗體的實(shí)例。

 

1.準(zhǔn)備蛋白質(zhì)溶液(溶液A):

為了標(biāo)記50μg蛋白質(zhì)(假設(shè)目標(biāo)蛋白質(zhì)濃度為1 mg / mL),將5μL(總反應(yīng)體積的10%)反應(yīng)緩沖液(組分B)與50μL目標(biāo)蛋白質(zhì)溶液混合。

注1:如果蛋白質(zhì)濃度不同,請相應(yīng)調(diào)整蛋白質(zhì)體積,使~50μg蛋白質(zhì)可用于標(biāo)記反應(yīng)。

注2:為了標(biāo)記100μg蛋白質(zhì)(假設(shè)目標(biāo)蛋白質(zhì)濃度為1 mg / mL),將10μL(總反應(yīng)體積的10%)反應(yīng)緩沖液(組分B)與100μL目標(biāo)蛋白質(zhì)溶液混合。

注3:蛋白質(zhì)應(yīng)溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中;如果蛋白質(zhì)溶解在甘氨酸緩沖液中,必須用1X PBS(pH 7.2-7.4)透析,或使用Amicon Ultra-0.5,Ultracel-10膜,10 kDa(來自Millipore的cat#UFC501008)去除游離胺或銨鹽(如硫酸銨和乙酸銨)。

注4:用牛血清白蛋白(BSA)或明膠穩(wěn)定的不純抗體。                                 

注5:如果蛋白質(zhì)濃度低于1 mg / mL,結(jié)合效率會(huì)顯著降低。為獲得標(biāo)記效率,建議最終蛋白質(zhì)濃度范圍為1-2 mg / mL。

 

2.運(yùn)行結(jié)合反應(yīng):

2.1將蛋白質(zhì)溶液(溶液A)加入一小瓶標(biāo)記染料(組分A)中,通過反復(fù)移液幾次將其充分混合,或?qū)⑿∑繙u旋幾秒鐘。

注意:使用標(biāo)記染料的兩個(gè)小瓶(組分A)通過將100μg蛋白質(zhì)分成2x50μg蛋白質(zhì)并使每個(gè)50μg蛋白質(zhì)與一小瓶標(biāo)記染料反應(yīng)來標(biāo)記100μg蛋白質(zhì)。 將兩個(gè)小瓶合并用于下一步。

2.2將綴合反應(yīng)混合物在室溫下保持30-60分鐘。

注意:如果需要,可以旋轉(zhuǎn)或搖動(dòng)綴合反應(yīng)混合物更長的時(shí)間。

 

3.停止共軛反應(yīng):

3.1加入5uL(50μg蛋白質(zhì))或10μL(100μg蛋白質(zhì)),這是TQ染色猝滅緩沖液(組分C)總反應(yīng)體積的10%到共軛反應(yīng)混合物中(來自步驟2.2),混合。

3.2在室溫下孵育10分鐘。

3.3使用標(biāo)記的蛋白質(zhì)(抗體)。

 

蛋白質(zhì)共軛物的儲(chǔ)存

蛋白質(zhì)綴合物應(yīng)在載體蛋白(例如0.1%牛血清白蛋白)存在下以> 0.5mg / mL儲(chǔ)存。 為了更長時(shí)間的儲(chǔ)存,可以將蛋白質(zhì)綴合物凍干或分成單次使用的等分試樣并在≤-20℃下儲(chǔ)存。

 

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貨號

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