Ex?(nm)	501	Em?(nm)	521
分子量	994.86	溶劑	DMSO
儲(chǔ)存條件	在零下15度以下保存,?避免光照

鈣黃綠素, AM CAS 148504-34-1是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于細(xì)胞活力測定的試劑，Calcein AM是一種疏水性化合物，很容易滲透完整的活細(xì)胞。它廣泛用于細(xì)胞活力測定。通過細(xì)胞內(nèi)酯酶水解非熒光鈣黃綠素AM產(chǎn)生強(qiáng)熒光的親水鈣黃綠素，其在細(xì)胞質(zhì)中良好保留。酯酶活性與小瓶細(xì)胞的數(shù)量成比例，因此與由鈣黃綠素AM的酯酶催化水解產(chǎn)生的鈣黃綠素的熒光強(qiáng)度直接相關(guān)。 Calcein AM是用于標(biāo)記和監(jiān)測活細(xì)胞細(xì)胞功能的的熒光探針之一。然而，Calcein AM的單色使得在多色應(yīng)用中不可能使用這種有價(jià)值的試劑。例如，由于Calcein AM具有與GFP相同的顏色，因此不可能將Calcein AM與GFP轉(zhuǎn)染的細(xì)胞組合使用。百螢生物是AAT Bioquest 的中國代理商，為您提供的鈣黃綠素, AM CAS 148504-34-1。

實(shí)驗(yàn)方案

使用細(xì)胞活力指標(biāo)AM酯類

AM酯是非極性酯，其易于穿過活細(xì)胞膜，并且通過活細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞酯酶快速水解。 AM酯廣泛用于非侵入性地將各種極性熒光探針加載到活細(xì)胞中。但是，使用AM酯時(shí)必須小心，因?yàn)樗鼈円子谒猓貏e是在溶液中。它們應(yīng)在使用前重新配制成高質(zhì)量的無水二甲基亞砜（DMSO）。DMSO儲(chǔ)備溶液可以在20℃下干燥儲(chǔ)存并避光。在這些條件下，AM酯應(yīng)穩(wěn)定數(shù)月。

以下是我們推薦的將AM酯加載到活細(xì)胞中的方案。該說明書僅提供指南，實(shí)際應(yīng)根據(jù)您的具體需求進(jìn)行修改。

a）在高質(zhì)量無水DMSO中制備2至5mM AM酯的儲(chǔ)備溶液。非離子洗滌劑Pluronic®F-127有時(shí)用于增加AM酯的水溶性。

注意：在稀釋到上樣緩沖液中之前，可將等體積的20％Pluronic®F-127溶液添加到細(xì)胞活力指示劑的DMSO儲(chǔ)備溶液中。終的Pluronic®F-127濃度約為0.02％。

注意：不建議在Pluronic®F-127存在下長期儲(chǔ)存AM酯。

b）在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，要么將細(xì)胞活力的固體指示劑溶解在DMSO中，要么將等分的指示劑儲(chǔ)備溶液解凍至室溫。在您選擇的緩沖液（如Hanks和Hepes緩沖液）中制備1至10μM的工作溶液。對于大多數(shù)細(xì)胞系，建議終濃度范圍為4至5μM的細(xì)胞活力指標(biāo)。細(xì)胞加載所需指標(biāo)的確切濃度必須根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。

c）如果您的細(xì)胞含有有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，可以在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入丙H舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以減少脫酯化指標(biāo)的泄漏。在室溫或37℃下將細(xì)胞與AM酯孵育20分鐘至1小時(shí)。

d）在不含細(xì)胞活力指示劑的緩沖液（含有陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制劑，如果適用）中洗滌細(xì)胞以除去過量的探針。

注意：通過流式細(xì)胞術(shù)立即分析細(xì)胞樣品，以確定在零時(shí)間沒有洗滌的每個(gè)細(xì)胞的平均熒光。

e）在所需的Ex / Em波長下進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 。