J82細胞

細胞名稱：人膀胱移行細胞癌（STR鑒定正確）

細胞簡稱：J82細胞

細胞別名： J-82; J 82; J82COT; J82 COT

貨號：TCH-C221

規(guī)格：1×10?cells/T25 培養(yǎng)瓶

參考目錄價格：15 00元 (干冰運輸需另加200元干冰費)  

種屬來源：人

組織來源：膀胱

特征：移行細胞癌

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)體系： MEM+10%FBS+1%P/S

J82細胞培養(yǎng)基貨號：TCH-G221

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：48-72 h

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存

質量檢測：細菌、真菌、支原體檢測均為陰性

J82細胞源自一名58歲膀胱移行細胞癌的白人男性。胞內無橋粒，有大量粗面內質網(wǎng)及突出絨毛，表達ras基因。

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J82細胞培養(yǎng)步驟：

使用配套培養(yǎng)基貨號：TCH-G221

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：48-72 h

J82細胞傳代培養(yǎng)方法：

1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；

2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞 10-20s，吸走潤洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使鋪勻瓶底細胞層；

4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；

5.消化到細胞間隙變大，但未脫落時加2-3ml培養(yǎng)基終止消化；

6.混勻細胞，900rpm離心3-5min，棄上清；

7.加新的培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；

8.補足培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

注意事項 ：不同品牌消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間

消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。

J82細胞凍存操作步驟：

凍存液：可有使用海星生物的一步凍存液，使用一步凍存法進行細胞凍存。（不需要程序降溫盒）

凍存規(guī)格 200-300萬/ml，1ml每管

如果采用程序凍存法的可以參考以下步驟：

1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；

2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；

3.將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4 度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入 -80度過夜，第二天轉入液氮保存

J82細胞培養(yǎng)注意事項：

1.凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案

2.由于J82細胞貼壁較弱，消化時間偏短，注意控制消化時間；

3.注意控制細胞密度，過高或者過低都可能影響細胞狀態(tài)，不要長時間高密度培養(yǎng)；

4.細胞生長較快，注意及時換液及傳代；

參考文獻：

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The cells form poorly differentiated squamous cell carcinomas.