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Jurkat-Cas9細(xì)胞

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更新時(shí)間:2023-06-18 07:24:19瀏覽次數(shù):139次

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Jurkat-Cas9細(xì)胞是Jurkat-FHCRC細(xì)胞株(Jurkat細(xì)胞株的衍生)的一個(gè)克隆。Jurkat細(xì)胞株來(lái)源于一個(gè)14歲男孩的外周血;經(jīng)佛波酯和外源凝集素或抗T3單克隆抗體中的一種誘導(dǎo)后可產(chǎn)生大量IL-2(IL-2的產(chǎn)生需兩種類(lèi)型的誘導(dǎo)劑);表達(dá)T細(xì)胞受體、CD3。

Jurkat-Cas9細(xì)胞

細(xì)胞名稱:Jurkat-Cas9細(xì)胞 人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞Cas9穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系

細(xì)胞簡(jiǎn)稱:Jurkat-Cas9細(xì)胞

產(chǎn)品貨號(hào):TCH-C225-M01

修飾基因:Cas9

修飾類(lèi)型:過(guò)表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)

轉(zhuǎn)導(dǎo)方法:慢病毒轉(zhuǎn)染

抗性基因:Hygro

細(xì)胞鑒定:Q-PCR檢測(cè)合格

種屬來(lái)源:人

組織來(lái)源:外周血

疾病特征:急性T淋巴細(xì)胞白血病

細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性:懸浮生長(zhǎng)

培養(yǎng)體系:RPMI-1640+10%FBS+1%Glutamax+1% Sodium Pyruvate+1%P/S

傳代比例:1:3-1:6,每2-3天換液一次

傳代周期:24-48 h

培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%CO2,溫度:37℃

凍存條件:60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO,液氮儲(chǔ)存

質(zhì)量檢測(cè):細(xì)菌、真菌、支原體檢測(cè)均為陰性

   Jurkat-Cas9細(xì)胞 是Jurkat-FHCRC細(xì)胞株(Jurkat細(xì)胞株的衍生)的一個(gè)克隆。Jurkat細(xì)胞株來(lái)源于一個(gè)14歲男孩的外周血;經(jīng)佛波酯和外源凝集素或抗T3單克隆抗體中的一種誘導(dǎo)后可產(chǎn)生大量IL-2(IL-2的產(chǎn)生需兩種類(lèi)型的誘導(dǎo)劑);表達(dá)T細(xì)胞受體、CD3。

細(xì)胞接收后處理方法

1.運(yùn)輸方式:凍存管(默認(rèn)發(fā)送方式)

① 請(qǐng)?jiān)谑盏郊?xì)胞后,先檢查包裝是否完整,干冰是否充足,凍存管有無(wú)破損等情況,并核對(duì)細(xì)胞管上的標(biāo)簽信息,細(xì)胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況,請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

② 收到細(xì)胞后如不立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn),則請(qǐng)將細(xì)胞放至-80℃或液氮中保存。

③ 實(shí)驗(yàn)前開(kāi)啟水浴鍋并預(yù)熱培養(yǎng)基,并備好15mL離心管加入5mL預(yù)熱后的培養(yǎng)基。

④ 將凍存管置于37℃水浴鍋內(nèi),快速搖動(dòng)解凍直到內(nèi)容物融化,同時(shí)需注意避免水面沒(méi)過(guò)管口。

⑤ 將凍存管外壁進(jìn)行常規(guī)消毒后,在超凈臺(tái)內(nèi)小心開(kāi)蓋,盡量避免氣泡溢出,輕柔吹打數(shù)次,轉(zhuǎn)移至15mL離心管內(nèi)。使用1 mL培養(yǎng)基清洗凍存管內(nèi)壁,一并收集至15mL離心管內(nèi)。

⑥ 250g離心5min,收集細(xì)胞沉淀,棄掉上清并加入2mL培養(yǎng)基重懸。

⑦ 取20μL細(xì)胞懸液至EP管,臺(tái)盼藍(lán)染色并計(jì)數(shù),記錄細(xì)胞數(shù)量和存活率。如有異常請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系,如無(wú)臺(tái)盼藍(lán),可略過(guò)該步驟。

⑧ 將重懸后的細(xì)胞接種至合適大小的培養(yǎng)器皿中,放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。

⑨ 24h后鏡下拍照并反饋我們,換液后繼續(xù)培養(yǎng)。

2.運(yùn)輸方式:培養(yǎng)瓶(貼壁細(xì)胞)

① 請(qǐng)?jiān)谑盏郊?xì)胞后,先檢查包裝是否完整,有無(wú)破損漏液的情況,并核對(duì)細(xì)胞瓶上的標(biāo)簽信息,細(xì)胞瓶數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況,請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

② 觀察瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基是否澄清,鏡下觀察細(xì)胞是否狀態(tài)良好,并將細(xì)胞容器外壁進(jìn)行常規(guī)消毒后,置于培養(yǎng)箱內(nèi)放置2-3h,讓脫壁的細(xì)胞可以重新貼附。

③ 小心開(kāi)蓋移去瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基,更換為細(xì)胞專用的培養(yǎng)基,按照培養(yǎng)器皿決定用量。若細(xì)胞脫壁過(guò)多,可將原培養(yǎng)基離心獲得細(xì)胞沉淀,再接種回原瓶?jī)?nèi)。

④ 鏡下拍照并反饋我們,如細(xì)胞匯合度較低,則放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。如細(xì)胞匯合度達(dá)到80%以上,則可按照常規(guī)方法進(jìn)行消化傳代。

3.運(yùn)輸方式:培養(yǎng)瓶(懸浮細(xì)胞)

① 請(qǐng)?jiān)谑盏郊?xì)胞后,先檢查包裝是否完整,有無(wú)破損漏液的情況,并核對(duì)細(xì)胞瓶上的標(biāo)簽信息,細(xì)胞瓶數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況,請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

② 觀察瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基是否澄清,鏡下觀察細(xì)胞是否狀態(tài)良好,拍照并反饋我們。

③ 將細(xì)胞容器外壁進(jìn)行常規(guī)消毒后,置于超凈工作臺(tái)內(nèi)小心開(kāi)蓋。將瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基全部轉(zhuǎn)移至若干50 mL離心管內(nèi),并清洗培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)壁一并收集。

④ 250g離心5min收集細(xì)胞沉淀,棄掉上清,使用新鮮的培養(yǎng)基重懸至合適密度。接種至合適的培養(yǎng)器皿中,置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

⑤ 培養(yǎng)24h后觀察細(xì)胞狀態(tài)和密度,按照常規(guī)方法進(jìn)行傳代。

4.運(yùn)輸方式:血清管

① 請(qǐng)?jiān)谑盏郊?xì)胞后,先檢查包裝是否完整,有無(wú)破損漏液的情況,并核對(duì)細(xì)胞管上的標(biāo)簽信息,細(xì)胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況,請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

② 收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),如不能及時(shí)處理,請(qǐng)將細(xì)胞放至常溫環(huán)境,通常15-25℃為佳,并盡量在24h內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)。否則細(xì)胞狀態(tài)和存活率將會(huì)受到一定的影響。

③ 血清管懸液可能會(huì)呈現(xiàn)一定程度的渾濁狀態(tài),這屬于正?,F(xiàn)象,請(qǐng)放心操作。

④ 將血清管外壁進(jìn)行常規(guī)消毒后,在超凈臺(tái)內(nèi)小心開(kāi)蓋,盡量避免氣泡溢出,輕柔吹打數(shù)次,轉(zhuǎn)移至15mL離心管內(nèi)。

⑤ 吸取1mL 培養(yǎng)基清洗血清管內(nèi)壁,同樣轉(zhuǎn)移至15mL管,并吹打均勻。

⑥ 取20μL細(xì)胞懸液至EP管,臺(tái)盼藍(lán)染色并計(jì)數(shù),記錄細(xì)胞數(shù)量和存活率。如有異常請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系,如無(wú)臺(tái)盼藍(lán),可略過(guò)該步驟。

⑦ 250g離心5min,收集細(xì)胞沉淀,并接種至合適大小的培養(yǎng)器皿中,放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。

⑧ 24h后鏡下拍照并反饋我們,并根據(jù)匯合度繼續(xù)培養(yǎng)或消化傳代。

5.運(yùn)輸方式:“細(xì)胞膠囊"技術(shù)
①  “細(xì)胞膠囊"包括細(xì)胞管和Buffer共2個(gè)試劑管。請(qǐng)?jiān)谑盏郊?xì)胞后,先檢查真空包裝袋內(nèi)的“細(xì)胞膠囊"管身是否完好,培養(yǎng)液是否外滲,并核對(duì)管身上的標(biāo)簽信息,細(xì)胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況,請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

②  收到“細(xì)胞膠囊"后請(qǐng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),如不能及時(shí)處理,請(qǐng)將細(xì)胞放至常溫環(huán)境,通常15-25℃為佳,并盡量在24 h內(nèi)完成實(shí)驗(yàn),否則細(xì)胞狀態(tài)和存活率將會(huì)受到一定的影響?!凹?xì)胞膠囊"管內(nèi)的培養(yǎng)液可能會(huì)呈現(xiàn)一定程度的渾濁狀態(tài),這屬于正?,F(xiàn)象,請(qǐng)放心操作。

③ 用75%酒精裝袋表面,在超凈臺(tái)內(nèi)取出細(xì)胞膠囊管和Buffer管,小心的打開(kāi)細(xì)胞膠囊管蓋,盡量避免氣泡溢出。 

④ 使用移液槍將細(xì)胞膠囊管中的培養(yǎng)液全部棄去。

⑤ 將Buffer全部加入到細(xì)胞膠囊管中,擰緊管蓋,上下顛倒3-5 min。

⑥ 觀察到細(xì)胞膠囊溶解后,小心開(kāi)蓋,使用移液槍輕柔吹打數(shù)次,轉(zhuǎn)移到15 mL離心管內(nèi)。

⑦ 取20μL細(xì)胞懸液至EP管,臺(tái)盼藍(lán)染色并計(jì)數(shù),記錄細(xì)胞數(shù)量和存活率。如有異常請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

⑧ 250 g離心4 min,收集細(xì)胞沉淀,并接種到合適大小的培養(yǎng)器皿中,放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。

⑨ 24 h 后顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),觀察細(xì)胞時(shí)請(qǐng)拍100×、200×各2-3張照片進(jìn)行留存,所拍照片應(yīng)盡量清晰,并根據(jù)匯合度繼續(xù)培養(yǎng)或消化傳代。

參考文獻(xiàn):

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