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基因敲除細胞株-?MHCC97H KO-hKLF4?

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更新時間:2023-06-18 08:13:26瀏覽次數(shù):154次

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細胞名稱:基因敲除細胞株-MHCC97H KO-hKLF4細胞簡稱:MHCC97H KO-hKLF4產(chǎn)品貨號:CGKO-M2125修飾基因:hKLF4修飾類型:敲除轉(zhuǎn)導方法:質(zhì)粒電轉(zhuǎn)抗性基因:Puro克隆類型:純合子細胞鑒定:PCR,測序

基因敲除細胞株-MHCC97H KO-hKLF4

細胞名稱:基因敲除細胞株- MHCC97H KO-hKLF4

細胞簡稱:MHCC97H KO-hKLF4

產(chǎn)品貨號:CGKO-M2125

修飾基因:hKLF4

修飾類型:敲除

轉(zhuǎn)導方法:質(zhì)粒電轉(zhuǎn)

抗性基因:Puro

克隆類型:純合子

細胞鑒定:PCR,測序

種屬來源:人

組織來源:肝

疾病特征: 高轉(zhuǎn)移潛能肝癌細胞

細胞形態(tài):上皮細胞樣

生長特性:貼壁生長

培養(yǎng)體系:DMEM-H+10%FBS+1%Glutamax+1% Sodium Pyruvate+1%P/S

傳代比例:1:3-1:6,每2-3天換液一次

傳代周期:48-72 h

培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%CO2,溫度:37℃

凍存條件:60%基礎培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO,液氮儲存

質(zhì)量檢測:細菌、真菌、支原體檢測均為陰性

參考文獻:

1. Dang H., Steinway S.N., Ding W., Rountree C.B.

Induction of tumor initiation is dependent on CD44s in c-Met(+) hepatocellular carcinoma.

BMC Cancer 15:161-161(2015)

2. Tian M.-M., Cheng H., Wang Z.-Q., Su N., Liu Z.-X., Sun C.-Q., Zhen B., Hong X.-C., Xue Y., Xu P.

Phosphoproteomic analysis of the highly-metastatic hepatocellular carcinoma cell line, MHCC97-H.

Int. J. Mol. Sci. 16:4209-4225(2015)

3. Wang K., Lim H.Y., Shi S., Lee J., Deng S., Xie T., Zhu Z., Wang Y., Pocalyko D., Yang W.J., Rejto P.A., Mao M., Park C.-K., Xu J.

Genomic landscape of copy number aberrations enables the identification of oncogenic drivers in hepatocellular carcinoma.

Hepatology 58:706-717(2013)

4. Li Y., Tian B., Yang J., Zhao L., Wu X., Ye S.-L., Liu Y.-K., Tang Z.-Y.

Stepwise metastatic human hepatocellular carcinoma cell model system with multiple metastatic potentials established through consecutive in vivo selection and studies on metastatic characteristics.

J. Cancer Res. Clin. Oncol. 130:460-468(2004)

5. Ding S.-J., Li Y., Shao X.-X., Zhou H., Zeng R., Tang Z.-Y., Xia Q.-C.

Proteome analysis of hepatocellular carcinoma cell strains, MHCC97-H and MHCC97-L, with different metastasis potentials.

Proteomics 4:982-994(2004)


|   細胞接收后處理方法

1.運輸方式:凍存管(默認發(fā)送方式)

① 請在收到細胞后,先檢查包裝是否完整,干冰是否充足,凍存管有無破損等情況,并核對細胞管上的標簽信息,細胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況,請及時與我們聯(lián)系。

② 收到細胞后如不立即進行實驗,則請將細胞放至-80℃或液氮中保存。

③ 實驗前開啟水浴鍋并預熱培養(yǎng)基,并備好15mL離心管加入5mL預熱后的培養(yǎng)基。

④ 將凍存管置于37℃水浴鍋內(nèi),快速搖動解凍直到內(nèi)容物融化,同時需注意避免水面沒過管口。

⑤ 將凍存管外壁進行常規(guī)消毒后,在超凈臺內(nèi)小心開蓋,盡量避免氣泡溢出,輕柔吹打數(shù)次,轉(zhuǎn)移至15mL離心管內(nèi)。使用1 mL培養(yǎng)基清洗凍存管內(nèi)壁,一并收集至15mL離心管內(nèi)。

⑥ 250g離心5min,收集細胞沉淀,棄掉上清并加入2mL培養(yǎng)基重懸。

⑦ 取20μL細胞懸液至EP管,臺盼藍染色并計數(shù),記錄細胞數(shù)量和存活率。如有異常請及時與我們聯(lián)系,如無臺盼藍,可略過該步驟。

⑧ 將重懸后的細胞接種至合適大小的培養(yǎng)器皿中,放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)。

⑨ 24h后鏡下拍照并反饋我們,換液后繼續(xù)培養(yǎng)。

2.運輸方式:培養(yǎng)瓶(貼壁細胞)

① 請在收到細胞后,先檢查包裝是否完整,有無破損漏液的情況,并核對細胞瓶上的標簽信息,細胞瓶數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況,請及時與我們聯(lián)系。

② 觀察瓶內(nèi)的培養(yǎng)基是否澄清,鏡下觀察細胞是否狀態(tài)良好,并將細胞容器外壁進行常規(guī)消毒后,置于培養(yǎng)箱內(nèi)放置2-3h,讓脫壁的細胞可以重新貼附。

③ 小心開蓋移去瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,更換為細胞專用的培養(yǎng)基,按照培養(yǎng)器皿決定用量。若細胞脫壁過多,可將原培養(yǎng)基離心獲得細胞沉淀,再接種回原瓶內(nèi)。

④ 鏡下拍照并反饋我們,如細胞匯合度較低,則放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)。如細胞匯合度達到80%以上,則可按照常規(guī)方法進行消化傳代。

3.運輸方式:培養(yǎng)瓶(懸浮細胞)

① 請在收到細胞后,先檢查包裝是否完整,有無破損漏液的情況,并核對細胞瓶上的標簽信息,細胞瓶數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況,請及時與我們聯(lián)系。

② 觀察瓶內(nèi)的培養(yǎng)基是否澄清,鏡下觀察細胞是否狀態(tài)良好,拍照并反饋我們。

③ 將細胞容器外壁進行常規(guī)消毒后,置于超凈工作臺內(nèi)小心開蓋。將瓶內(nèi)的培養(yǎng)基全部轉(zhuǎn)移至若干50 mL離心管內(nèi),并清洗培養(yǎng)瓶內(nèi)壁一并收集。

④ 250g離心5min收集細胞沉淀,棄掉上清,使用新鮮的培養(yǎng)基重懸至合適密度。接種至合適的培養(yǎng)器皿中,置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

⑤ 培養(yǎng)24h后觀察細胞狀態(tài)和密度,按照常規(guī)方法進行傳代。

4.運輸方式:血清管

① 請在收到細胞后,先檢查包裝是否完整,有無破損漏液的情況,并核對細胞管上的標簽信息,細胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況,請及時與我們聯(lián)系。

② 收到細胞后請盡快進行實驗,如不能及時處理,請將細胞放至常溫環(huán)境,通常15-25℃為佳,并盡量在24h內(nèi)完成實驗。否則細胞狀態(tài)和存活率將會受到一定的影響。

③ 血清管懸液可能會呈現(xiàn)一定程度的渾濁狀態(tài),這屬于正?,F(xiàn)象,請放心操作。

④ 將血清管外壁進行常規(guī)消毒后,在超凈臺內(nèi)小心開蓋,盡量避免氣泡溢出,輕柔吹打數(shù)次,轉(zhuǎn)移至15mL離心管內(nèi)。

⑤ 吸取1mL 培養(yǎng)基清洗血清管內(nèi)壁,同樣轉(zhuǎn)移至15mL管,并吹打均勻。

⑥ 取20μL細胞懸液至EP管,臺盼藍染色并計數(shù),記錄細胞數(shù)量和存活率。如有異常請及時與我們聯(lián)系,如無臺盼藍,可略過該步驟。

⑦ 250g離心5min,收集細胞沉淀,并接種至合適大小的培養(yǎng)器皿中,放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)。

⑧ 24h后鏡下拍照并反饋我們,并根據(jù)匯合度繼續(xù)培養(yǎng)或消化傳代。

5.運輸方式:“細胞膠囊"技術
①  “細胞膠囊"包括細胞管和Buffer共2個試劑管。請在收到細胞后,先檢查真空包裝袋內(nèi)的“細胞膠囊"管身是否完好,培養(yǎng)液是否外滲,并核對管身上的標簽信息,細胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況,請及時與我們聯(lián)系。

②  收到“細胞膠囊"后請盡快進行實驗,如不能及時處理,請將細胞放至常溫環(huán)境,通常15-25℃為佳,并盡量在24 h內(nèi)完成實驗,否則細胞狀態(tài)和存活率將會受到一定的影響?!凹毎z囊"管內(nèi)的培養(yǎng)液可能會呈現(xiàn)一定程度的渾濁狀態(tài),這屬于正常現(xiàn)象,請放心操作。

③ 用75%酒精裝袋表面,在超凈臺內(nèi)取出細胞膠囊管和Buffer管,小心的打開細胞膠囊管蓋,盡量避免氣泡溢出。 

④ 使用移液槍將細胞膠囊管中的培養(yǎng)液全部棄去。

⑤ 將Buffer全部加入到細胞膠囊管中,擰緊管蓋,上下顛倒3-5 min。

⑥ 觀察到細胞膠囊溶解后,小心開蓋,使用移液槍輕柔吹打數(shù)次,轉(zhuǎn)移到15 mL離心管內(nèi)。

⑦ 取20μL細胞懸液至EP管,臺盼藍染色并計數(shù),記錄細胞數(shù)量和存活率。如有異常請及時與我們聯(lián)系。

⑧ 250 g離心4 min,收集細胞沉淀,并接種到合適大小的培養(yǎng)器皿中,放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)。

⑨ 24 h 后顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),觀察細胞時請拍100×、200×各2-3張照片進行留存,所拍照片應盡量清晰,并根據(jù)匯合度繼續(xù)培養(yǎng)或消化傳代。

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