骨髓間充質干細胞成軟骨誘導分化培養(yǎng)基

產(chǎn)品簡介

 骨髓間充質干細胞在誘導培養(yǎng)基的作用下，會逐漸向軟骨細胞方向分化,軟骨細胞外具有一層富含蛋白多糖的基質，是成軟骨分化的標志物，可被阿利辛藍染成藍綠色。骨髓間充質干細胞成軟骨誘導分化培養(yǎng)基適用于骨髓間充質干細胞成軟骨誘導，能提高誘導效率。

骨髓間充質干細胞成軟骨誘導分化培養(yǎng)基

產(chǎn)品特點：

• 骨髓間充質干細胞成軟骨誘導分化培養(yǎng)基產(chǎn)品性能穩(wěn)定，可提高骨髓間充質干細胞成軟骨誘導效率;  
• 同時適用于骨髓間充質干細胞平面誘導和三維誘導; 
• 含染色液，方便使用；
• 即用型產(chǎn)品，開封即可使用，更省時省力。

（以下步驟僅供參考，詳情參見說明書）

1. 間充質干細胞的準備:

將對數(shù)生長期的細胞消化下來計數(shù)，取3×105個細胞轉移到15mL離心管中，250g離心4min。

棄上清，加入0.5mL成軟骨誘導分化培養(yǎng)基基礎液，重懸細胞，150g離心5min。小心棄去上清，加入0.5mL成軟骨誘導分化培養(yǎng)基誘導液，重懸細胞，150g離心5min。

將15mL離心管的管蓋稍稍旋開，放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)。

2. 細胞分化誘導:

24h后觀察細胞沉淀形變團聚的情況，如有明顯的變化，則小心輕柔地撥動管底，嘗試讓細胞團脫離管底，全部浸潤在誘導液中。

置于37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)約21天，通常每2天更換一次新鮮配制的成軟骨誘導分化培養(yǎng)基誘導液。注意觀察細胞團成球情況及表面光滑度，決定終止細胞誘導的時間，并進行染色鑒定。

3. 染色鑒定

a)軟骨球固定：將軟骨球從離心管中轉移至EP管，并使用1×PBS清洗兩次，最后置于適量的4%中性中。

b)石蠟包埋切片：軟骨球經(jīng)石蠟包埋后切片。

c)阿利辛藍染色：將石蠟切片脫蠟，使用阿利辛藍染液染色30min，用自來水流水沖洗2min，蒸餾水沖洗1次。

d)誘導評估：顯微鏡下觀察成軟骨染色效果，并進行圖像采集和誘導評估。誘導成功時，軟骨組織中的內酸性粘多糖可被阿利辛藍染成藍綠色。

NOTE: 間充質干細胞的成軟骨分化水平因細胞類型、細胞供體來源，培養(yǎng)條件、細胞代次、細胞狀態(tài)和分化時間等因素而異。

|  舉例說明：成軟骨誘導步驟（平面誘導）

（以下步驟僅供參考，詳情參見說明書）

1. 將對數(shù)生長期的細胞消化下來計數(shù)，成軟骨誘導分化培養(yǎng)基細胞重懸細胞，離心后調整細胞密度密度1-2.0×107cells/mL。

2. 20μL懸滴到24孔板。（20μL含有4×105細胞）。37℃培養(yǎng)3h使細胞貼壁。

3. 補充200uL誘導分化培養(yǎng)基正常培養(yǎng)，每隔2-3天換液一次。按照以上換液頻率誘導21-28天，并注意觀察細胞形態(tài)變化。

4. 細胞固定：吸去培養(yǎng)基使用適量1×PBS清洗一次，棄去后取適量4%中性覆蓋培養(yǎng)器皿底面，室溫固定30-60min，棄去固定液再使用1×PBS清洗兩次。

5. 阿利新藍染色：向清洗干凈的誘導孔內加入適量染色液，避光靜置染色30min。吸去阿利新藍染色液，用1×PBS清洗兩次，并加入適量1×PBS避免細胞干燥。

6. 誘導評估：顯微鏡下觀察成軟骨染色效果，并進行圖像采集和誘導評估。誘導成功時，軟骨組織中的內酸性粘多糖可被阿利辛藍染成藍綠色。

NOTE:間充質干細胞的成軟骨分化水平因細胞類型、細胞供體來源，培養(yǎng)條件、細胞代次、細胞狀態(tài)和分化時間等因素而異。