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間充質干細胞成軟骨?誘導分化培養(yǎng)基

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更新時間:2023-06-18 08:41:05瀏覽次數(shù):218次

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骨髓間充質干細胞在誘導培養(yǎng)基的作用下,會逐漸向軟骨細胞方向分化,軟骨細胞外具有一層富含蛋白多糖的基質,是成軟骨分化的標志物,可被阿利辛藍染成藍綠色。骨髓間充質干細胞成軟骨誘導分化培養(yǎng)基適用于骨髓間充質干細胞成軟骨誘導,能提高誘導效率。產(chǎn)品特點:產(chǎn)品性能穩(wěn)定,可提高骨髓間充質干細胞成軟骨誘導效率;同時適用于骨髓間充質干細胞平面誘導和三維誘導;含染色液,方便使用;即用型產(chǎn)品,開封即可使用,更省時省力。

骨髓間充質干細胞成軟骨誘導分化培養(yǎng)基


成軟骨誘導分化培養(yǎng)基

產(chǎn)品簡介

 骨髓間充質干細胞在誘導培養(yǎng)基的作用下,會逐漸向軟骨細胞方向分化,軟骨細胞外具有一層富含蛋白多糖的基質,是成軟骨分化的標志物,可被阿利辛藍染成藍綠色。骨髓間充質干細胞成軟骨誘導分化培養(yǎng)基適用于骨髓間充質干細胞成軟骨誘導,能提高誘導效率。

骨髓間充質干細胞成軟骨誘導分化培養(yǎng)基

產(chǎn)品特點:

  • 骨髓間充質干細胞成軟骨誘導分化培養(yǎng)基產(chǎn)品性能穩(wěn)定,可提高骨髓間充質干細胞成軟骨誘導效率;  
  • 同時適用于骨髓間充質干細胞平面誘導和三維誘導; 
  • 含染色液,方便使用;
  • 即用型產(chǎn)品,開封即可使用,更省時省力。


|  舉例說明:成軟骨誘導步驟(三維誘導)

(以下步驟僅供參考,詳情參見說明書)

1. 間充質干細胞的準備:

將對數(shù)生長期的細胞消化下來計數(shù),取3×105個細胞轉移到15mL離心管中,250g離心4min。

棄上清,加入0.5mL成軟骨誘導分化培養(yǎng)基基礎液,重懸細胞,150g離心5min。小心棄去上清,加入0.5mL成軟骨誘導分化培養(yǎng)基誘導液,重懸細胞,150g離心5min。

將15mL離心管的管蓋稍稍旋開,放置于37℃,5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)。

2. 細胞分化誘導:

24h后觀察細胞沉淀形變團聚的情況,如有明顯的變化,則小心輕柔地撥動管底,嘗試讓細胞團脫離管底,全部浸潤在誘導液中。

置于37℃,5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)約21天,通常每2天更換一次新鮮配制的成軟骨誘導分化培養(yǎng)基誘導液。注意觀察細胞團成球情況及表面光滑度,決定終止細胞誘導的時間,并進行染色鑒定。

3. 染色鑒定

a)軟骨球固定:將軟骨球從離心管中轉移至EP管,并使用1×PBS清洗兩次,最后置于適量的4%中性中。

b)石蠟包埋切片:軟骨球經(jīng)石蠟包埋后切片。

c)阿利辛藍染色:將石蠟切片脫蠟,使用阿利辛藍染液染色30min,用自來水流水沖洗2min,蒸餾水沖洗1次。

d)誘導評估:顯微鏡下觀察成軟骨染色效果,并進行圖像采集和誘導評估。誘導成功時,軟骨組織中的內酸性粘多糖可被阿利辛藍染成藍綠色。

NOTE: 間充質干細胞的成軟骨分化水平因細胞類型、細胞供體來源,培養(yǎng)條件、細胞代次、細胞狀態(tài)和分化時間等因素而異。


|  舉例說明:成軟骨誘導步驟(平面誘導)

(以下步驟僅供參考,詳情參見說明書)

1. 將對數(shù)生長期的細胞消化下來計數(shù),成軟骨誘導分化培養(yǎng)基細胞重懸細胞,離心后調整細胞密度密度1-2.0×107cells/mL。

2. 20μL懸滴到24孔板。(20μL含有4×105細胞)。37℃培養(yǎng)3h使細胞貼壁。

3. 補充200uL誘導分化培養(yǎng)基正常培養(yǎng),每隔2-3天換液一次。按照以上換液頻率誘導21-28天,并注意觀察細胞形態(tài)變化。

4. 細胞固定:吸去培養(yǎng)基使用適量1×PBS清洗一次,棄去后取適量4%中性覆蓋培養(yǎng)器皿底面,室溫固定30-60min,棄去固定液再使用1×PBS清洗兩次。

5. 阿利新藍染色:向清洗干凈的誘導孔內加入適量染色液,避光靜置染色30min。吸去阿利新藍染色液,用1×PBS清洗兩次,并加入適量1×PBS避免細胞干燥。

6. 誘導評估:顯微鏡下觀察成軟骨染色效果,并進行圖像采集和誘導評估。誘導成功時,軟骨組織中的內酸性粘多糖可被阿利辛藍染成藍綠色。

NOTE:間充質干細胞的成軟骨分化水平因細胞類型、細胞供體來源,培養(yǎng)條件、細胞代次、細胞狀態(tài)和分化時間等因素而異。


成軟骨誘導分化示意圖


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