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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

直接免疫熒光法測抗原

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一、基本原理:

將熒光素標(biāo)記在相應(yīng)的抗體上,直接與相應(yīng)抗原反應(yīng).其優(yōu)點是方法簡便.  特異性高,非特異性熒光染色少.缺點是敏感性偏低;而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體.此法常用于細(xì)菌.  病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢.  皮膚活檢的免疫病理檢查。


二、試劑與儀器:

1.  磷酸鹽緩沖鹽水(PBS):0.01 mol/L,pH7.4

2.  熒光標(biāo)記的抗體溶液:以0.01 mol/L,pH7.4的PBS進(jìn)行稀釋

3.  緩沖甘油:分析純無熒光的甘油9份+ pH9.2,0.2M碳酸鹽緩沖液1份配制

4.  搪瓷桶三只(內(nèi)有0.01 mol/L,pH7.4的PBS 1500 ml)

5.  有蓋搪瓷盒一只(內(nèi)鋪一層浸濕的紗布墊)

6.  熒光顯微鏡

7.  玻片架

8.  濾紙

9.  37℃溫箱等


三、實驗步驟:

1.  滴加0.01 mol/L,pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上,10 min后棄去,使標(biāo)本保持一定濕度;

2.  滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液,使其*覆蓋標(biāo)本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間(參考:30 min);

3.  取出玻片,置玻片架上,先用0.01 mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01 mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸3-5 min,不時振蕩;

4.  取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標(biāo)本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋;

5.  立即用熒光顯微鏡觀察.觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度,一般可用"+"表示:(-)無熒光;(±)極弱的可疑熒光;(+)熒光較弱,但清楚可見;(++)熒光明亮;(+++ --++++)熒光閃亮.待檢標(biāo)本特異性熒光染色強(qiáng)度達(dá)"++"以上,而各種對照顯示為(±)或(-),即可判定為陽性。


四、注意事項:

1.  對熒光標(biāo)記的抗體的稀釋,要保證抗體的蛋白有一定的濃度,一般稀釋度不應(yīng)超過1:20,抗體濃度過低,會導(dǎo)致產(chǎn)生的熒光過弱,影響結(jié)果的觀察。

2.  染色的溫度和時間需要根據(jù)各種不同的標(biāo)本及抗原而變化,染色時間可以從10 min到數(shù)小時,一般30 min已足夠.染色溫度多采用室溫(25℃左右),高于37℃可加強(qiáng)染色效果,但對不耐熱的抗原(如流行性乙型腦炎病毒)可采用0~2℃的低溫,延長染色時間.低溫染色過夜較37℃30 min效果好的多。

3.  為了保證熒光染色的正確性,試驗時需設(shè)置下述對照,以排除某些非特異性熒光染色的干擾.

(1)標(biāo)本自發(fā)熒光對照:標(biāo)本加1~2滴0.01 mol/L,pH7.4的PBS。

(2)特異性對照(抑制試驗):標(biāo)本加未標(biāo)記的特異性抗體,再加熒光標(biāo)記的特異性抗體。

(3)陽性對照:已知的陽性標(biāo)本加熒光標(biāo)記的特異性抗體。

    如果標(biāo)本自發(fā)熒光對照和特異性對照呈無熒光或弱熒光,陽性對照和待檢標(biāo)本呈強(qiáng)熒光,則為特異性陽性染色。

4.  一般標(biāo)本在高壓汞燈下照射超過3 min,就有熒光減弱現(xiàn)象,經(jīng)熒光染色的標(biāo)本在當(dāng)天觀察,隨著時間的延長,熒光強(qiáng)度會逐漸下降。

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