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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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ELISA試劑盒
ATCC細胞
細胞
蛋白
生化試劑
標準品
擔(dān)體
中國藥典標準物質(zhì)
IBL試劑盒
*原時間試劑
血清
肉類及相關(guān)產(chǎn)品 實驗室耗材系列 細胞系列 抗體純化試劑 單抗、多抗研制用材料 細胞培養(yǎng)用材料和試劑 免疫分析相關(guān)試劑 免疫分析科研試劑盒 抗體純化試劑盒 抗血清系列 動物血漿系列 熱滅活血清系列 碳吸附過濾血清系列 培養(yǎng)細菌專用血清系列 動物血清系列(pet瓶) HRP標記抗原 天然純化抗原 動物Ig類抗原 基因重組抗原 膠體金標記一抗(多抗為抗原親和純化,單抗為G或A蛋白親和純化 ) HRP標記二抗(抗原親和純化) HRP標記一抗(多抗為抗原親和純化,單抗為G或A蛋白親和純化) 多克隆抗體二抗/PcAb(未標注的為G或A蛋白親和純化) 多克隆抗體一抗/PcAb(未標注的為G或A蛋白親和純化) 單克隆抗體二抗/McAb(G或A蛋白親和純化) 單克隆抗體一抗/McAb(G或A蛋白親和純化) 裂解血 抗凝動物血系列 脫纖維動物血系列 無菌過濾動物血清系列 輻照滅菌動物血清系列 無菌采制動物血清系列
科研抗體
PCR試劑盒
科研細胞
細胞生物學(xué)試劑

人雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒操作說明

時間:2011/11/3閱讀:482
分享:

人雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:96T
0.5pg/ml- 16pg/ml
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中雌二醇受體(ER)含量。
實驗原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人雌二醇受體(ER)水平。用純化的人軍團菌抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入雌二醇受體(ER),再與HRP標記的軍團菌抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雌二醇受體(ER)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人雌二醇受體(ER)濃度。
人雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒組成 :
1、30倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶
2、酶標試劑6ml×1瓶8標準品(32pg/ml)0.5ml×1瓶
3、酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶
4、樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
5、顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
6、顯色劑B液6ml×1瓶12密封袋1個
標本要求:
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟:
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
16pg/ml5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
8pg/ml4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
4pg/ml3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
2pg/ml2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1pg/ml1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié):
1.準備試劑,樣品和標準品
2.加入準備好的樣品和標準品,37℃反應(yīng)30分鐘
3.洗板5次,加入酶標試劑,37℃反應(yīng)30分鐘
4.洗板5次,加入顯色液A、B,37℃反應(yīng)10分鐘
5.加入終止液
6.15分鐘之內(nèi)度OD值
7.計算:
計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
注意事項:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:2-8℃。
2.有效期:6個月

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