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上海宸功生物技術(shù)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第10年

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血磷濃度檢測(cè)試劑盒說明書

時(shí)間:2023/2/17閱讀:869
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注意:正式測(cè)定之前選擇2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

規(guī)格:100T/96S

測(cè)定意義:


微量法


血磷主要指血中的無機(jī)磷,以無機(jī)磷鹽的形式存在。血漿中鈣、磷濃度關(guān)系密切,在以 mg/dL表示時(shí),二者的乘積(Ca×P) 3040。當(dāng)(Ca×P)>40,則鈣和磷以骨鹽形式沉積于骨組織;若(Ca×P)<35 則妨礙骨的鈣化,甚至可使骨鹽溶解,影響成骨作用。血鈣和血磷含量的相對(duì)穩(wěn)定依賴于鈣、磷的吸收與排泄和鈣化及脫鈣兩種代謝的相對(duì)平衡。

測(cè)定原理:

去除血清中有機(jī)磷后,無機(jī)磷鹽與鉬酸銨試劑生成磷鉬酸,還原后呈藍(lán)色,在620nm 有光吸收;通過測(cè)定620nm吸光度,計(jì)算血液中磷含量。

自備儀器和用品:

離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。

試劑組成和配置:

試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。試劑二:液體×1 瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存。 臨用前配制,依次加入11mL蒸餾水充分溶解,再加入試劑二,充分混合。

標(biāo)準(zhǔn)液:液體×1 支,1mmol/L無機(jī)磷,4℃保存。

血磷濃度測(cè)定操作:

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到620nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 取出標(biāo)準(zhǔn)液,室溫解凍。

3. 血清預(yù)處理:吸取50μL血清,加950μL試劑一,混勻后室溫8000rpm,離心10min,取上清液,待測(cè)。

4. 空白管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入50μL蒸餾水,50μL試劑一,100μL試劑三,混勻后靜置10min,于620nm測(cè)定吸光度,記為A空白管。

5. 標(biāo)準(zhǔn)管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入50μL標(biāo)準(zhǔn)液,50μL試劑一,100μL試劑三,混勻后靜置10min,于620nm測(cè)定吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

6. 測(cè)定管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入50μL上清液,50μL試劑一,100μL試劑三,混勻后靜置10min,于620nm測(cè)定吸光度,記為A測(cè)定管。

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

血磷濃度計(jì)算:

血磷含量(mmol/dL=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)]×樣品稀釋倍數(shù)

×V 樣總=2×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)

C 標(biāo)準(zhǔn)液:1 mmol/L;樣品稀釋倍數(shù):(50μL血清+950μL試劑一)÷50μL血清=20。

 

注意事項(xiàng):

1、 試劑三需臨用前配制,如未用完,4℃保存,最多可使用3天;


2 測(cè)定過程中,應(yīng)盡量避免溶血,因?yàn)榧t細(xì)胞中有機(jī)磷酯進(jìn)入血清后可被酶水解而使得血清無機(jī)磷含量增高。


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