石蠟切片脂質(zhì)油紅O間接染色試劑盒

產(chǎn)品說明書

主要用途
石蠟切片脂質(zhì)油紅O間接染色試劑是一種旨在使用特殊固定處理和高度脂溶性偶氮染料油性紅O染色技術(shù)，分析石蠟包埋組織切片中的中性甘油三脂、脂質(zhì)以及脂蛋白等脂質(zhì)狀況的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心改良傳統(tǒng)方法、成功實驗證明的。主要適用于各種人體和動物組織石蠟切片的脂質(zhì)檢測。用于成脂細胞定性、細胞病理學(xué)分析（脂質(zhì)細胞瘤；LIPOID）和識別（脂肪肉瘤；liposarcoma）等研究。產(chǎn)品即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，著色清晰。
技術(shù)背景
脂類物質(zhì)（LIPIDS）是一類脂溶性（疏水性）的自然分子，包括脂肪酸（FATTY ACID）及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂和磷脂，以及其它固醇類（STEROL）物質(zhì)，例如膽固醇。脂類物質(zhì)在機體中具有能量儲存的作用，是膜結(jié)構(gòu)的組成成分和細胞信號分子。油性紅O（Oil Red O），又稱為27號紅色溶劑（Solvent Red 27）或蘇丹紅5B（Sudan Red 5B），是一種脂溶性偶氮染料（LYSOCHROME AZO DYE）。其分子式為C26H24N4O，分子量為408.51。染色顯示脂類物質(zhì)呈紅色。由于石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過程中，有機溶劑容易破壞和減少組織中的脂質(zhì)成分，因此防護和固定組織中的脂質(zhì)成分是油性紅O染色的關(guān)鍵。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液（Reagent A） XX毫升
固著液（Reagent B） XX毫升
乳化液（Reagent C） XX毫升
凈化液（Reagent D） XX毫升
氧化液（Reagent E） XX毫升
修復(fù)液（Reagent F） XX毫升
去石蠟液（Reagent G） XX毫升
補水液A（Reagent H） XX毫升
補水液B（Reagent I） XX毫升
補水液C（Reagent J） XX毫升
補水液D（Reagent K） XX毫升
脫水液（Reagent L） XX毫升
染色液（Reagent M） XX毫升
澄清液（Reagent N） XX毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保證6月
1
乳化液（Reagent C）
清理液（Reagent A）
固著液（Reagent B）
清理液（Reagent A）
經(jīng)典水相封片液用于染色后封片處理
用于常規(guī)染色后復(fù)染蘇木素復(fù)染試劑盒
用戶自備
無離子水：用于清洗樣品
無菌手術(shù)刀和鑷子：用于組織塊處理
恒溫培養(yǎng)箱：用于組織處理孵育
6孔細胞培養(yǎng)板：用于組織處理的容器
小型玻璃染色缸：用于組織或切片處理的容器
切片機：用于組織切片
明膠化載玻片和蓋玻片：用于切片后鋪片
中性樹脂：用于切片封片
光學(xué)顯微鏡：用于切片染色后觀察分析
實驗步驟
一、 樣本固著處理
1． 用無菌手術(shù)刀將新鮮組織切成2毫米厚的組織塊
2． 即刻用無菌鑷子夾起組織塊，小心放進XX毫升中浸泡3秒2次
3． 轉(zhuǎn)移到XX毫升里
4． 室溫下浸泡孵育24小時，避免光照
5． 即刻用無菌鑷子夾起組織塊，小心放進上述XX毫升中浸泡1小時
6． 小心轉(zhuǎn)移到XX毫升里（注意：如果組織已經(jīng)使用福爾馬林固定的，則從這一步驟開始）
7． 在56℃恒溫培養(yǎng)箱里浸泡孵育XX小時，避免光照
8． 準備1個6孔細胞培養(yǎng)板，分別加入XX毫升到3個孔里
9． 再分別加入XX毫升到另外3個孔里
10．小心轉(zhuǎn)移組織塊到上述6孔板的*個孔里
11．室溫下孵育XX小時
12．轉(zhuǎn)移組織塊到上述6孔板的第二個孔里
13．室溫下孵育XX小時
14．依次直到第六個孔
15．小心轉(zhuǎn)移組織塊到新鮮的XX毫升里
16．在4℃冰箱里浸泡孵育XX小時，避免光照
17．小心轉(zhuǎn)移到XX毫升用戶自備的無離子水里
18．室溫下孵育XX小時
19．小心轉(zhuǎn)移到XX毫升里
20．室溫下浸泡孵育24小時，避免光照
21．小心轉(zhuǎn)移到20毫升用戶自備的無離子水里
22．室溫下孵育8小時（注意：可以孵育24小時）
23．用綿紙吸干組織快
24．即刻進行石蠟包埋
25．取出組織塊，進行緩慢石蠟切片，為10微米厚，并鋪片在明膠化載玻片上
2
凈化液（Reagent D）
清理液（Reagent A）
氧化液（Reagent E）
修復(fù)液（Reagent F）
二、 去石蠟處理
1. 取出10片待測的10微米厚的石蠟包埋的組織切片
2. 放進80℃烘箱，孵育30分鐘
3. 室溫下靜置15分鐘
4. 按下表依次放進小染色缸里孵育
染色缸
孵育時間
XX毫升
15分鐘
XX毫升
15分鐘
XX毫升
15分鐘
XX毫升
3分鐘
XX毫升
3分鐘
XX毫升
3分鐘
XX毫升
3分鐘
5. 小心移去切片上的
6. 小心加上XX微升在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
7. 室溫下孵育XX分鐘
8. 小心移去切片上的
三、 樣本染色處理
1． 小心加上XX微升，覆蓋整個生長表面
2． 室溫下靜置5分鐘
3． 小心抽去
4． 重復(fù)實驗步驟1至3一次
5． 小心加上XX微升，覆蓋整個生長表面
6． 室溫下靜置7分鐘；或直至可見紅色
7． 小心抽去
8． 室溫下，小心加入XX微升
9． 室溫下孵育XX分鐘
10．小心抽去
四、樣本復(fù)染處理
1. 小心加上XX微升，覆蓋整個生長表面
2. 室溫下孵育XX分鐘
3
去石蠟液（Reagent G） 去石蠟液（Reagent G）
去石蠟液（Reagent G）
補水液A（Reagent H）
補水液B（Reagent I）
補水液C（Reagent J）
補水液D（Reagent K）
補水液D（Reagent K）
清理液（Reagent A）
清理液（Reagent A）
脫水液（Reagent L）
脫水液（Reagent L）
染色液（Reagent M）
染色液（Reagent M）
清理液（Reagent A）
清理液（Reagent A）
平衡液（Reagent N）
3. 小心抽去
4. 小心加入XX微升
5. 室溫下孵育XX分鐘
6. 小心抽去
7. 樣本復(fù)染處理（蘇木素）
8. 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：脂類物質(zhì)呈現(xiàn)紅色（如果復(fù)染則細胞核呈現(xiàn)籃色）
注意事項
1． 本產(chǎn)品為10次操作
2． 操作時，須戴手套
3． 建議組織塊厚度不宜超過2毫米，否則影響試劑滲透，保護脂質(zhì)成分
4． 乳化液（Reagent C）為不透明的溶液
5． 鋪片須使用明膠化載玻片，否則染色會掉片
6． 建議使用玻璃染色缸，除說明書規(guī)定之外
7． 染色時更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干
8． 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面
9． 整個操作，在避光狀態(tài)下進行
10．樣品染色避免過度，肉眼可見紅色即可終止染色
11．建議使用
12．染色完成后，即刻進行光學(xué)顯微鏡觀察
13．樣品染色后保存，避免光照
14．封片處理，避免使用有機溶劑類包括乙醇等，而使用水相封片液；建議使用經(jīng)典水相封片
15．本公司提供系列脂類染色試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標準
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰