羅丹明123簡易細(xì)胞核外形態(tài)染色試劑盒

產(chǎn)品說明書

主要用途

羅丹明123簡易細(xì)胞核外形態(tài)染色試劑是一種旨在通過熒光染料羅丹明123快速集聚在細(xì)胞核周圍的活體線粒體，呈現(xiàn)黃綠色，用于分析和觀察細(xì)胞核外圍形態(tài)的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞核外或線粒體形態(tài)（動(dòng)物、人體、植物、昆蟲等）的觀察。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，熒光清晰，操作簡捷，性能穩(wěn)定。 

技術(shù)背景

線粒體是細(xì)胞中重要的細(xì)胞器，大量存在于代謝旺盛的細(xì)胞中，分布在細(xì)胞核周圍。線粒體標(biāo)記熒光探針羅丹明123（Rhodamine123），是一種膜電位敏感的陽離子熒光染料，可以自由進(jìn)入細(xì)胞，高度選擇性地聚集在線粒體。在活細(xì)胞狀態(tài)下直接染色，借助480nm或500nm激發(fā)波長可以清晰看到被染成黃綠色的線狀或顆粒小體的線粒體，分布在細(xì)胞核周圍。

產(chǎn)品內(nèi)容

染色液（Reagent A） 微升

產(chǎn)品說明書                1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，避免光照；有效保證6月

用戶自備

磷酸緩沖液：用于清洗樣品

微型臺(tái)式離心機(jī)：用于懸浮細(xì)胞的操作

蓋玻片：用于染色后封片

熒光顯微鏡：用于觀察細(xì)胞核DNA染色

實(shí)驗(yàn)步驟

• 貼壁細(xì)胞染色

• 準(zhǔn)備1個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)48孔板的待測細(xì)胞，每孔鋪滿率達(dá)70％
• （注意：可以使用載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和其它培養(yǎng)孔板，見注意事項(xiàng)5）
• 小心抽去細(xì)胞培養(yǎng)液
• 輕輕沿著孔壁加入500微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS）到細(xì)胞培養(yǎng)孔，覆蓋培養(yǎng)孔表面
• 小心抽去1毫升磷酸緩沖鹽溶液（PBS）
• 小心加入100微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），覆蓋培養(yǎng)孔表面
• 小心加入xx微升染色液（Reagent A） 
• 輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)板，使其混勻
• 室溫下孵育60分鐘，避免光照（或37℃培養(yǎng)箱里孵育15分鐘）
• 小心抽掉染色液
• 小心加入200微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），覆蓋培養(yǎng)孔表面
• 即刻在倒置熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察：

• 懸浮細(xì)胞染色

• 將懸浮細(xì)胞（1 X 10⁶細(xì)胞）移入到1.5毫升離心管
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入500微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），混勻細(xì)胞顆粒群
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入100微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），混勻細(xì)胞顆粒群
• 加入xx微升染色液（Reagent A），混勻
• 室溫下孵育60分鐘，避免光照（或37℃培養(yǎng)箱里孵育15分鐘）
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入100微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），混勻細(xì)胞顆粒群
• 移出5微升到載玻片上，放上蓋玻片
• 即刻在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察： 
• 或即刻進(jìn)行細(xì)胞流式儀分析：

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為100次操作
• 本產(chǎn)品友好使用于雙重染色或重疊染色
• 操作時(shí)須戴手套
• 操作時(shí)，避免污染母液
• 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞：載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和各種培養(yǎng)孔板，須相應(yīng)調(diào)整試劑溶液：

• 本產(chǎn)品可用于懸浮細(xì)胞或細(xì)胞脫離處理后染色
• 如果染色固定后的細(xì)胞，室溫下孵育時(shí)間15分鐘
• 孵育時(shí)，須避免光照
• 建議細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行分析，不宜超過2小時(shí)
• 細(xì)胞流式儀分析前，須混勻內(nèi)容物
• 細(xì)胞流式儀分析，細(xì)胞檢測量不得少于10000個(gè)
• 本公司提供系列簡易細(xì)胞核染色分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰