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上海宸功生物技術(shù)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第10年

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PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測(cè)定試劑盒

時(shí)間:2017/1/18閱讀:2806
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HL20126

 PicoGreenDNA熒光定量測(cè)定試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明書

 

主要用途

 

PicoGreenDNA熒光定量測(cè)定試劑是一種旨在通過(guò)使用PicoGreen熒光染料與樣品中雙鏈DNA的高度特異性結(jié)合而產(chǎn)生熒光信號(hào)來(lái)定量樣品中DNA含量的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種原核生物和真核生物的細(xì)胞或組織DNA以及環(huán)境中DNA含量分析。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,性能穩(wěn)定,高度敏感。

技術(shù)背景

作為DNA染色劑之一的PicoGreen熒光染料特異性地樣品中雙鏈DNA結(jié)合,產(chǎn)生熒光信號(hào)。PicoGreen技術(shù)可以檢測(cè)到低達(dá)0.5納克雙鏈DNA的變化。DNA的微量增加引起熒光信號(hào)強(qiáng)度(Intensity)或相對(duì)熒光單位(RFU)的顯著增加。其自發(fā)熒光(Autofluorescence)忽略不計(jì),重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差異(Standard Deviation)低,不受樣品化學(xué)成分的干擾。

產(chǎn)品內(nèi)容

染色液(Reagent A)

62.5微升

稀釋液(Reagent B)

15毫升

標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent C)

1毫升

說(shuō)明書

 1份

 

保存方式

 

保存染色液Reagent A)和標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent C)在-20℃冰箱里,其余的保存在4冰箱里,染色液(Reagent A)避免光照,有效保證6

 

用戶自備

 

15毫升離心管:用于工作液配制的容器

比色皿或96孔板:用于熒光分析的容器

熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀:用于熒光定量分析

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

  • 測(cè)定準(zhǔn)備

 

  • 準(zhǔn)備好待測(cè)樣品,置于冰槽里
  • 設(shè)定好熒光分光光度儀(溫度為37℃):激發(fā)波長(zhǎng)480nm,散發(fā)波長(zhǎng)530nm,并置零 
  • 實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的染色液(Reagent A)置于冰槽里融化。然后移出xx毫升稀釋液(Reagent B)到新的15毫升離心管,加入25微升染色液(Reagent A),混勻后,用錫紙包裹,標(biāo)記為染色工作液,放在暗室里。然后進(jìn)行下列操作。

 

  • 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線

 

  • 準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管,標(biāo)記為15號(hào)管
  • 分別加入500微升稀釋液(Reagent B)到每個(gè)離心管
  • 移取500微升標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent C)到1號(hào)管,混勻
  • 小心移取500微升1號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent C)到2號(hào)管,混勻
  • 小心移取500微升2號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent C)到3號(hào)管,混勻
  • 小心移取500微升3號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent C)到4號(hào)管,混勻
  • 15號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用;標(biāo)準(zhǔn)管含量見下表

 

管號(hào)

緩沖液(Reagent B

標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent C

標(biāo)準(zhǔn)DNA總量

1

500微升

500微升

1微克

2

500微升

500微升1號(hào)管

0.5

3

500微升

500微升2號(hào)管

0.25

4

500微升

500微升3號(hào)管

0.125

5

500微升

空對(duì)照

0

 

  • 移取500微升含有染色液(Reagent A)和稀釋液(Reagent B)的染色工作液新的比色皿
  • 加入500微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液
  • 室溫下,孵育5分鐘,避免光照
  • 即刻放進(jìn)熒光分光光度儀測(cè)讀:獲得相對(duì)熒光單位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
  • 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟8至11四次
  • 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為相對(duì)熒光單位(RLU);橫坐標(biāo)(X軸)為DNA含量(微克)

 

  • 樣品檢測(cè)

 

  • 移取500微升含有染色液(Reagent A)和稀釋液(Reagent B)的染色工作液新的比色皿
  • 加入500微升待測(cè)樣品
  • 室溫下,孵育5分鐘,避免光照
  • 即刻放進(jìn)熒光分光光度儀測(cè)讀:獲得相對(duì)熒光單位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
  • 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)DNA含量微克
  • 樣品實(shí)際DNA濃度:

 

 

注意事項(xiàng)

 

  • 本產(chǎn)品為20次(比色皿和100次(96孔板)操作,包括標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定
  • 操作時(shí),須戴手套
  • 使用新鮮配制的染色工作液,務(wù)必不要超過(guò)2小時(shí),且注意避光
  • 建議使用塑料管配制染色工作液,而不是玻璃制品
  • 孵育時(shí),避免光照
  • 系統(tǒng)檢測(cè),標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定1次即可;如果儀更換,則需要重新測(cè)定1次
  • 如果熒光讀數(shù)過(guò)高,可以相應(yīng)稀釋樣品量
  • 可以使用熒光酶標(biāo)儀檢測(cè),試劑用量和體系均除以5,包括標(biāo)準(zhǔn)DNA含量,其計(jì)算公式

 

[根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)DNA濃度(微克X樣品稀釋倍數(shù)0.1(樣品容量;毫升)微克/毫升

 

  • 鹽類、尿素、乙醇、去垢劑、蛋白、瓊脂糖、單鏈DNA和RNA不會(huì)干擾檢測(cè)
  • 本公司提供系列DNA檢測(cè)試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定高度敏感

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