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蝦堿性磷酸酶使用注意事項(xiàng)

2023-5-5  閱讀(853)

蝦堿性磷酸酶使用注意事項(xiàng)


Alkaline Phosphatase,中文名堿性磷酸酶,可將DNA、RNA的5’端磷酸基團(tuán)去除,常用于阻止載體的自連作用:在分子克隆實(shí)驗(yàn)中,DNA連接酶催化DNA連接時(shí)需要有磷酸基團(tuán)的存在,載體在經(jīng)酶切后會(huì)在切點(diǎn)端保留一個(gè)磷酸基團(tuán)。而載體經(jīng)堿性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端無磷酸基團(tuán),因而不可以和自身3’ 端連接。因此連接反應(yīng)中載體本身會(huì)優(yōu)先發(fā)生的連接反應(yīng)被阻止,提高了目的片段插入率。另外,堿性磷酸酶還可制備用于5’端標(biāo)記的DNA模板。


本品為蝦來源的堿性磷酸酶,可以降解幾乎所有磷酸單酯,但是該酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。該酶作用于末端去磷酸化,無論末端為粘端,還是平端。SAP 也可以用來降解PCR 反應(yīng)中的dNTP,用于后續(xù)測序和SNP分析。


來源(Source) 來自畢赤酵母,克隆有北極蝦(Pandalus rorealis)的蝦堿性磷酸酶基因 

質(zhì)量控制(Quality Control) 無核糖核酸酶、脫氧核糖核酸酶污染 

純度(Purity) >95% 

熱滅活(Thermal Inactivation) 65℃溫浴5 min,活性完全不可逆喪失 

活性定義(Unit definition) 在25℃條件下,30分鐘能使1 μg經(jīng)HindⅢ(產(chǎn)生5’突出末端)消化的pUC19 DNA去磷酸化所需的酶量定位為1個(gè)活力單位。 


注意事項(xiàng)

1)1×SAP Buffer: 50mM Bis-Tris HCl (pH 6.0),1 mM MgCl2,0.1 mM ZnCl2,25℃溫育。

2)熱失活:65℃加熱5分鐘,不可逆失活。當(dāng)完成去磷酸化反應(yīng)后,無需純化產(chǎn)物,可以直接用于后續(xù)連接反應(yīng)。

3)為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

4) 本產(chǎn)品僅作科研用途!




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