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南京億迅生物科技有限公司
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快速限制性內(nèi)切酶質(zhì)量控制
2023-5-5 閱讀(354)
快速限制性內(nèi)切酶質(zhì)量控制
產(chǎn)品描述
FuniCut™系列內(nèi)切酶是通過基因工程重組技術(shù)，可在5~15 min內(nèi)精確完成DNA切割的快速限制性內(nèi)切酶，適用于快速切割質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物、基因組DNA等。FuniCut™系列快速內(nèi)切酶共用一種酶切緩沖液，從而簡化了酶切反應(yīng)體系，另外，有良好的酶活冗余度，可輕松處理底物過量或困難模板的酶切。
識別位置
5'-↓GATC-3'
3'-CTAG↑-5'
推薦反應(yīng)條件
1× FuniCut™ 緩沖液；
最適37°C孵育。
失活條件
80°C孵育20 min。
注意事項(xiàng)
1）3 h孵育未表現(xiàn)星號活性，延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號活性；
2）受Dam甲基化影響，序列完-全重疊，剪切阻斷；
3）受EcoBI甲基化影響，序列可能重疊，剪切阻斷；
4）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作；
5）本產(chǎn)品僅作科研用途！
質(zhì)量控制
1. 功能活性檢測：最適反應(yīng)溫度下，在20 μL反應(yīng)體系中，1 μL酶能夠在15 min內(nèi)完-全消化1 μg λDNA (Dam-)。
2. 超長時(shí)間孵育檢測：最適反應(yīng)溫度下，將1 μL酶與1 μg λDNA (Dam-)共孵育3 h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，但延長孵育時(shí)間可能出現(xiàn)星號活性。
3. 酶切-連接-再酶切檢測：最適反應(yīng)溫度下，使用1 μL酶消化底物，回收酶切產(chǎn)物，在22°C下使用適量T4 DNA連接酶可以將酶切產(chǎn)物重新連接，將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。
4. 非特異性內(nèi)切酶活性檢測：最適反應(yīng)溫度下，將1 μL酶與1 μg超螺旋質(zhì)粒DNA共同孵育4 h后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質(zhì)粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài)。
