細(xì)胞凍存和復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)里面容易出問題的部分，因此必須注意以下幾點：
 

　　1. 注意無菌操作。
 

　　2. 取細(xì)胞的過程中可能會接觸液氮，一定注意帶好防凍手套，護(hù)目鏡。
 

　　此項尤為重要，如果凍存管密封不嚴(yán)，細(xì)胞凍存管可能漏入液氮，解凍時，在水浴中搖晃，凍存管中的氣溫急劇上升，可導(dǎo)致爆炸，所以，一定要戴保護(hù)眼鏡和手套，復(fù)蘇過程中應(yīng)蓋上恒溫水浴鍋的蓋。
 

　　3. 應(yīng)在1-2min內(nèi)使凍存液*融化。如果復(fù)溫速度太慢，則會造成細(xì)胞損傷。另外，細(xì)胞復(fù)蘇后的操作Hao在4℃冰浴中進(jìn)行，以減少冷凍保護(hù)劑對細(xì)胞的毒性。
 

　　4. 復(fù)蘇過程中，升溫的速率要大，把從液氮取出的細(xì)胞在短的時間內(nèi)放入水浴鍋。
 

　　5. 離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度，以減少對細(xì)胞的損傷。
 

　　細(xì)胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時1ml細(xì)胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液，經(jīng)驗總結(jié)，培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。
 

　　復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題：復(fù)蘇1管細(xì)胞一般根據(jù)情況可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細(xì)胞濃度過低，不利于細(xì)胞的貼壁。
 

　　加培養(yǎng)基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度，從如果加培養(yǎng)基的太少，DMSO的濃度就會比較大，就會影響細(xì)胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響。還有一個說法是1%。所以如果凍存液的濃度是10%DMSO，那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。