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西安百螢生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第5年

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DNA定量試劑盒(熒光高靈敏度)針對(duì)CytoCite 和Qubit 熒光分析儀進(jìn)行了優(yōu)化

時(shí)間:2024/1/16閱讀:66
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英文名稱:Portelite™ Fluorimetric High Sensitivity DNA Quantitation Kit *Optimized for CytoCite™ and Qubit™ Fluorometers*

 

相關(guān)產(chǎn)品:17660      17661

產(chǎn)品規(guī)格:100 Tests   500Tests 

產(chǎn)品概述

DNA定量試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于定量DNA的試劑盒,DNA定量是用于各種基因組分析的DNA樣品制備中非常重要的。 這種Portelite dsDNA定量試劑盒提供了一種使用手持式熒光分析儀使用Helixyte Green探針定量dsDNA的快速方法。 它針對(duì)Cytocite 和Qubit 熒光計(jì)進(jìn)行了優(yōu)化。 Portelite dsDNA定量分析線性超過五個(gè)數(shù)量級(jí)。 該測(cè)定法對(duì)RNA上的雙鏈DNA(dsDNA)具有高度選擇性,并且設(shè)計(jì)為對(duì)于25pg / uL至100ng / uL的初始樣品濃度是準(zhǔn)確的。 Helixyte Green在與dsDNA結(jié)合后表現(xiàn)出大的熒光增強(qiáng),并且比UV吸光度讀數(shù)更敏感。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供優(yōu)質(zhì)的DNA定量試劑盒。 

 

適用儀器




量子位熒光計(jì)


Ex:

480 nm

Em:

520 nm 

規(guī)格:

0.2 mL PCR 小瓶

 




CytoCite 熒光計(jì)


Ex:

480 nm

Em:

520 nm

規(guī)格:

0.2 mL PCR小瓶

實(shí)驗(yàn)方案

操作步驟

簡要概述

準(zhǔn)備Helixyte 綠色工作溶液
在每個(gè)0.2 mL PCR管中加入190μL1XHelixyte Green 工作溶液(Cat#:
CCT100
將10μLDNA標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品加入每個(gè)試管中
在室溫下孵育2分鐘
使用CytoCite 熒光分析儀或Qubit 熒光分析儀監(jiān)測(cè)熒光

 

溶液制備

Helixyte Green 工作溶液制備:
為10個(gè)樣品制備足夠的工作溶液,將10μL Helixyte Green (組分A)加入2 mL DNA分析緩沖液(組分B)中。 注意:用鋁箔覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵?,以保護(hù)工作溶液免受光照。 注意:我們建議將此溶液用塑料容器而不是玻璃制備,因?yàn)槿玖峡赡軙?huì)吸附到玻璃表面。 為獲得效果,該溶液應(yīng)在其制備后幾小時(shí)內(nèi)使用。

 

樣品實(shí)驗(yàn)方案

        樣品體積是1~20μL(取決于DNA樣品的估計(jì)濃度)。推薦樣品體積為10μL,DNA濃度范圍為0.5~10 ng /μL。如果使用其他樣品量,請(qǐng)?jiān)跐舛扔?jì)算中調(diào)整稀釋倍數(shù)。

1.基于10μL樣品體積生成以下方案,DNA濃度在0.5~10 ng /μL范圍內(nèi)。

1.1在每個(gè)Cytocite 樣品管(#CCT100)或等效的0.2 mL PCR管中加入190μL1XHelixyte Green 工作溶液注意:使用薄壁聚丙烯,透明的0.2 mL PCR管,如#CCT100。

1.2將DNA標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品10μL加入每個(gè)試管中,然后渦旋混合2~3秒。

1.3讓所有試管在室溫下孵育2分鐘。

1.4將樣品插入CytoCite 或Quibit ,并用綠色熒光通道監(jiān)測(cè)熒光。按照適用于CytoCite 熒光分析儀的步驟進(jìn)行操作。

 

2.標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)曲線的制備

        對(duì)于Portelite 分析,您可以選擇使用DNA標(biāo)準(zhǔn)制作校準(zhǔn)曲線。 以下是生成定制DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線的簡要方案:

2.1用DNA Assay Buffer進(jìn)行稀釋,得到10,8,6,4,2,1,0.5,0 ng /μLDNA標(biāo)準(zhǔn)稀釋液。

2.2將190μLHelixyteGreen 工作溶液加入0.2 mL PCR管中。

2.3每管加入10μL標(biāo)準(zhǔn)品或10μL樣品。

2.4在室溫下孵育反應(yīng)2分鐘。

2.5將樣品插入CytoCite 并用綠色熒光通道檢測(cè)熒光。

 

數(shù)據(jù)分析

     從空白標(biāo)準(zhǔn)孔獲得的讀數(shù)(RFU)用作陰性對(duì)照。 從其他標(biāo)準(zhǔn)的讀數(shù)中減去該值,以獲得基線校正值。 然后,繪制標(biāo)準(zhǔn)讀數(shù)以獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線和方程。 該等式可用于計(jì)算濃度樣本。 我們建議使用在線線性回歸計(jì)算器。

image.png

圖1.使用Portelite 熒光DNA高靈敏度定量試劑盒生成的DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線。 使用FITC通道定量熒光強(qiáng)度,使用log-log best-fit計(jì)算回歸模型。 檢測(cè)限為10 pg /μL。

 


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