ReadiPrep 核/細(xì)胞質(zhì)分離試劑盒 可逐步分離哺乳動物細(xì)胞或組織中的核和細(xì)胞質(zhì)提取物。 分離的蛋白質(zhì)具有高濃度并保留其生物學(xué)活性。 該試劑盒的核和細(xì)胞質(zhì)提取物與許多下游應(yīng)用兼容，包括酶活性測定和熒光Western印跡等。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的ReadiPrep 核/細(xì)胞質(zhì)分離試劑盒。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1. 用PBS沖洗細(xì)胞

2. 加入500 µL細(xì)胞質(zhì)提取緩沖液

3. 離心20秒

4. 收集上清液（細(xì)胞質(zhì)提取物）

5. 將沉淀重新懸浮在150 µL 1X高鹽緩沖液中

6. 離心20分鐘

7. 收集上清液（核提取物）

溶液配制

工作溶液配制

1.細(xì)胞液提取緩沖液（1X）：將100 µL的10X蛋白酶抑制劑（組分C）和1 µL的DTT（組分D）添加到0.9 mL的細(xì)胞質(zhì)提取緩沖液（組分A）中。

2.核提取緩沖液（1X）：將100 µL 10X蛋白酶抑制劑（組分C）和1 µL DTT（組分D）添加到0.9 mL核提取緩沖液（組分B）中。

注意：0.5 mL 1X細(xì)胞質(zhì)提取緩沖液和150 µL 1X核提取緩沖液足以進(jìn)行1次測定，并根據(jù)需要準(zhǔn)備新鮮的緩沖液。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.用冷PBS沖洗細(xì)胞1次。 對于懸浮的細(xì)胞，請通過離心收集細(xì)胞。

2.向細(xì)胞中加入500 µL 1X Cytosol提取緩沖液。 對于貼壁細(xì)胞，將貼壁細(xì)胞刮入1.5 mL離心管中。

3.劇烈渦旋以全部重懸細(xì)胞。

4.以16,000 g離心1-2分鐘，然后將上清液（細(xì)胞質(zhì)提取物）轉(zhuǎn)移到另一個干凈的試管中。 將試管放在冰上以備下游使用或在-80°C下保存。

5.將沉淀重懸于150 µL 1X核提取緩沖液中。

6.劇烈渦旋以全部重懸沉淀。

7.將試管在4°C旋轉(zhuǎn)30分鐘。

8.以16,000g離心20分鐘，然后將上清液（核提取物）轉(zhuǎn)移到另一個干凈的試管中。 將試管放在冰上以備下游使用或在-80°C下保存。