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上海金穗生物科技有限公司

2013 2-19

變性膠體電泳與北方雜合分析

mRNA為單股,一般會卷繞成特定的三級結(jié)構(gòu),并與某些蛋白質(zhì)結(jié)合,而以messengerribonucleoproteinparticles(mRNPs)的型式存在于細(xì)胞內(nèi);自細(xì)胞抽取RNA時,一般會以...

2013 1-21

DEAE-纖維素 使用說明

1簡介DEAE-纖維素,它采用平均粒徑為50µm的顆粒型親水高分子聚合物,表面又用大分子糖鏈接枝,使它有更高的比表面積和更好的生物兼容性,它在高流水下保持更高載量,同時又具有更好的分辨率。...

2013 1-17

DEAE membrane吸附法分離與純化DNA片段

方法步驟:1)經(jīng)BamHI及HindIII作用的pBlueGus及pQE31,置65℃水浴10min,移至冰浴降溫后,以含EtBr的1.0%agarosegel進(jìn)行電泳。2)NA45以滅過菌的剪刀剪成...

2013 1-17

Silica gel吸附法分離與純化DNA片段

方法步驟:1)經(jīng)BamHI及HindIII作用的pBlueGus及pQE31,置于65℃水浴10min,移至冰浴降溫后,以含EtBr的1.0%agarosegel進(jìn)行電泳(兩種樣品各用六個wells,...

2013 1-16

Histochemical detection重組質(zhì)體的檢定

方法步驟:1)前一天進(jìn)行轉(zhuǎn)形的培養(yǎng)皿,當(dāng)菌落長至約0.5mm大小時,將培養(yǎng)皿移至4℃放置至少1h。2)準(zhǔn)備一張無菌的硝化纖維濾膜,以鉛筆在邊緣標(biāo)上組別?!粽埓魇痔缀笤倌萌V膜!3)打開培養(yǎng)皿蓋子,以兩...

2013 1-16

以phenol/chloroform 進(jìn)行DNA 萃取

方法步驟:◆注意!進(jìn)行這一部份實驗的前,請先確定pBlueGus/HindIII與pBlueGus/BamHI兩者的酵解反應(yīng)都已經(jīng)*。1)于酵解反應(yīng)#1與#2的微量離心管分別加入182μL去離子水。2...

2013 1-14

連接scFv和載體DNA并轉(zhuǎn)化大腸桿菌,構(gòu)建scFv突變文庫

[方法]1.配制1個50ul連接混合液,包含:●10×連接緩沖液,5uI●水,16ul●NcoI和NotI消化的pHENl(100g/ul),20ul●VcoI和NotI消化的scFv文庫(100g/...

2013 1-14

VHCDR3基因文庫和VL基因的擴(kuò)增

[方法]1.設(shè)計并合成含有CDR3隨機(jī)化序列的VHFOR引物。當(dāng)然必須以擬進(jìn)行親和力成熟的抗體VH基因作為設(shè)計的基礎(chǔ)。本例中,VHCDR3的7個氨基酸被隨機(jī)化。在每個隨機(jī)化位點中,保留了大約50%野生...

2013 1-11

創(chuàng)建輕鏈改組噬菌體文庫

[方法]1.配制50ulPCR反應(yīng)混合液,包含:●水,34.5ul●20XdNTP(每種5mmol/L),2,5ul●10XVent聚合酶緩沖液,5.0ul●LMB3引物(10pmol/u1),2.5...

2013 1-11

選擇和篩選親和力更高的抗體

在基于結(jié)合動力學(xué),也被稱為解離速率(κoff)]的選擇中,在將遠(yuǎn)遠(yuǎn)過量的非標(biāo)記抗原加入到混合液中并維持一段特定時間之前,將首先選用飽和量的標(biāo)記抗原使其與噬菌體群結(jié)果。通過確定與末標(biāo)記抗原競爭的持續(xù)的時...

2013 1-9

提高IHC方法敏感性的輔助手段

(1)蛋白酶消化蛋白酶消化可以去除覆蓋于抗原決定簇表面的雜蛋白,更為重要的是因甲醛固定而引起的交聯(lián)被打開,有利于抗原—抗體的結(jié)合,提高陽性檢測率。(2)抗原修復(fù)選擇適宜的修復(fù)液(pH值、離子濃度)、修...

2013 1-9

膠體金免疫金銀組織化學(xué)技術(shù)

①膠體金溶液可以重復(fù)制備,其顆粒大小可以控制,可較容易進(jìn)行免疫電鏡的雙重或多重標(biāo)記;②金標(biāo)探針有很高的電子密度,有特殊的分辨率,定位準(zhǔn)確;③金標(biāo)探針能發(fā)射二次電子和反射電子,是掃描電鏡目前的標(biāo)記物;④...

2013 1-7

白磷還原法制備膠體金分散顆粒

膠體金可用多種方法制備,其中應(yīng)用較為廣泛的是化學(xué)還原法。這一方法的基本原理是在氯化金水溶液中加入一定量的還原劑,使金離子還原為金原子,可用于制備膠體金的還原劑有50余種,但在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域內(nèi)zui為常用...

2013 1-7

制備膠體金分散顆粒的其他方法

乙醇—超聲波還原法(Baigent和Muller,1980)(1)取1%AuCl3·HCl水溶液lml加入100ml雙重蒸餾水。(2)用0.2m01/LK2C03調(diào)pH至7.2,再加入lml無水乙醇。...

2013 1-5

大規(guī)模連接及純化連接后的DNA

[方法]1.建立以下連接反應(yīng):●載體DNA(pG6AppG6B,pG6C)(10ug)xul●cDNA片段(3~5ug)yul●10×連接緩沖液40ul●T4DNA連接酶(6WeissU/ul)5ul...

2013 1-5

Topl0F’細(xì)胞中的電轉(zhuǎn)化及文庫儲存

[方法]1.加2~3ul純化的連接反應(yīng)物(zui大值為0.3ugDNA)到80ul的*0F’電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞中,輕輕搖晃混合。使用30ng(2ul)的pUCl9控制電轉(zhuǎn)化效率。2.將細(xì)胞+DNA懸浮液...

2012 12-31

從cDNA*鏈中擴(kuò)增VH和VL基因

[方法]1.在0.5ml微量離心管中配制50ulPCR反應(yīng)混合液,包括:●Millipore水,31.5ul●10×VentDNA聚合酶緩沖液,5.0ul●20×dNTP,2.5ul●正向引物,2.0...

2012 12-31

用scFv接頭PCR裝配VH和VL進(jìn)行scFv基因文庫的構(gòu)建

[方法]1.在0.5ml微量離心管內(nèi)配制以下PCR反應(yīng)混合液。配制成2個“反應(yīng)管”,1個含有V。文庫DNA,另1個則含有Vl文庫DNA。反應(yīng)管對照1對照2●scFV接頭DNA(100ng/ul)1.0...

2012 12-28

再擴(kuò)增scFv基因文庫以添加限制性位點進(jìn)行克隆

[方法]1.在0.5ml微量離心管中,配制兩個50/z1PCR反應(yīng)混合液(1個用于VH—VκscFv文庫,另1個用于Vu—VλscFv文庫),其中含有:●水,36.5//1●10XTag緩沖液,5.0...

2012 12-28

對scFv基因文庫及pHEN1噬菌體展示栽體的限制性消化

[方法]1,配制兩個100ulPCR反應(yīng)混合液來消化scFV文庫,其中1個用于VH-VκscFv文庫,另1個用于VH-VλscFv文庫,該混合液含有:●scFVDNA(1~4ug),50ul●水,33...

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