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上海金穗生物科技有限公司

2012 12-26

制備用于抗原上選擇的噬菌體抗體

轉化后,就得到了菌苔形式的抗體文庫??梢灾苽涑筛视蛢Υ嫖锉4嬗谝?0℃。這是一個原始文庫,象征著具有*價值的資源。的抗體文庫也是由這種原始文庫制備而來的。然而,當用大培養(yǎng)板鋪板擴增原始文庫時,會造成部...

2012 12-26

文庫甘油儲存料中制備噬菌體抗體

1.取適當數(shù)量(參見上述討論)的甘油文庫儲存料接種到含有250m12×TY/amp/glu的2L培養(yǎng)錐形瓶中。培養(yǎng)基的A600值應小于0.05。從每個培養(yǎng)瓶中取1ul鋪板確定起始接種物的細菌量。2.在...

2012 12-24

在固相抗原上選擇噬菌體抗體

1.用溶于PBS的2m1抗原(10—1000ug/m1)包被免疫管,室溫過夜。碳酸鹽緩沖液也可使用。2.用PBS洗滌試管3次,并用2%MPBS封閉非特異性結合位點,放在旋轉的轉臺上,37℃l小時。3....

2012 12-24

用可溶性*化抗原進行選擇

液相法可以解決直接包被于固相表面的抗原構象可能發(fā)生改變的問題。此外,這個方法也使以結合性親和力使基礎的選擇更加簡單,因為展示多個抗體的噬菌體并無選擇優(yōu)勢。液相法也易于控制抗原的濃度,這也有利于選擇到有...

2012 12-21

利用血清篩選噬菌體文庫交叉抑制實驗

1.將100ul含有2×1010個PEG—純化噬菌體顆粒的TBS,等量分加到多孔板各孔中,4℃孵育12小時。2.用PBST洗滌數(shù)次,在室溫下每孔加250/ll封閉液封閉2小時。3.用封閉液稀釋血清,其...

2012 12-21

利用血清篩選噬菌體文庫PCR擴增的模板

1.用無菌塑料吸嘴挑取一個AmpR噬菌粒菌落(直徑大約lmm)并將其轉入到0.2mlMicroAmp反應管中,內含20u1洗脫緩沖液。在GeneAmp9600PCR儀中,95℃加熱樣本10分鐘(避免用...

2012 12-19

噬菌體展示文庫fUSE5活體篩選特殊步驟

1.為了洗脫細菌,將900ul的K91KanTerrific肉湯菌液加入裂解后的細胞,并于室溫下孵育20分鐘。2.將步驟1所得全部倒入含有9m1四環(huán)素濃度為0.2ug/ml的NZY培養(yǎng)基的50m1錐形...

2012 12-19

噬菌體展示文庫活體篩選的通用步驟

1.通過腹腔注射濃度為1.25%(w/v)的阿佛丁來麻醉小鼠,劑量為每克體重注射15ul的阿佛丁。開始時用*注射300ul。用右手抓住一只小鼠尾部的并提起,使其后腿離地。然后用左手抓住鼠的頭和頸的后部...

2012 12-17

構建pⅧ噬菌粒庫:擴增與儲存

A.輔助噬菌體感染和pⅧ誘導產生1.按10:1感染重數(shù)加入VSC-M13輔助噬菌體[約1012空斑形成單位(pfu)]到100ml已轉化的細菌中(見實驗方案6.3)。于37℃靜置孵育30分鐘。2.將上...

2012 12-17

連接插入片段與BstⅪ消化的p8V5載體

A.連接反應1.在13m1離心管中混合下列物質:●20/igp8V5載體(經BstⅪ酶切和純化)●1.25ug插入DNA片段(經BstⅪ、BsiHKAI酶切和純化)●200ul10×連接緩沖液●4ul...

2012 12-14

感受態(tài)大腸桿菌SS320的制備

1.從新鮮(時間不超過1周)的2YT/tet平板上挑取單個大腸桿菌SS320的克隆,接種到lml2YT/tet培養(yǎng)基中。37℃200r/min孵育6~8小時。轉移培養(yǎng)基到含有50m12YT/tet培養(yǎng)...

2012 12-14

噬菌體展示文庫的再增殖

1,用一系列稀釋液感染大腸桿菌XLl-Blue(OD600=0.5~1.0),并涂布在用于噬菌粒篩選的適當培養(yǎng)基上,以測定噬菌體文庫儲液的感染性滴度(infectivitytitre)。這個滴度取決于...

2012 12-12

科學家發(fā)現(xiàn)基因小差異造成高矮有別

據(jù)《科學時報》報道姚明為何能長那么高?原因很可能在于基因的不同。英國科學家近日發(fā)現(xiàn)了一種對人類身高有決定性作用的基因,在其他條件不變的情況下,這種基因遺傳密碼只要有微小的變化,就可以促進身高增長一厘米...

2012 12-12

咖啡加運動可以有效降低皮膚癌的患病率

據(jù)《*》報道咖啡是許多人生活中*的飲品,其主要成分咖啡陰能夠幫助人們時刻保持充沛精力。但是科學家們近日發(fā)現(xiàn),除了這一功效外,喝咖啡加上經常運動可以有效降低皮膚癌的患病率。長時間的紫外線照射會傷害到人體...

2012 12-10

免疫印跡技術概述

免疫印跡從早期用抗體直接“著染”聚丙烯酰胺凝膠內的蛋白(Burridge1976;Showe等1976)發(fā)展為使用多樣化復制技術的方法。例如,將分離的多肽轉移至硝酸纖維素膜,化學活化的濾紙條或尼龍膜上...

2012 12-7

曬黑也跟抗癌蛋白質[p53]有著很密切的關系

當皮膚受到紫外光(ultravioletlight;uvlight)照射時,稱為角朊細胞(kerotinocyte)的皮膚細胞會開始分泌黑細胞促素(melanocyte-stimulatinghorm...

2012 12-7

胚胎干細胞首度被證明可以治愈癱瘓老鼠

當你在閱讀這篇報導時,在世界的某個角落可能就正發(fā)生不幸的車禍,造成受害者終生癱瘓而無法再行走?;蛘叽藭r此刻,在某個醫(yī)院診療室的神經科醫(yī)師,正無力回天地對病人宣判他們可能罹患多發(fā)性硬化癥或肌萎縮性脊髓側...

2012 12-5

制備單克隆抗體動物的選擇與免疫

1.動物的選擇純種BALB/C小鼠較溫順,離窩的活動范圍小,體弱,食量及排污較小,一般環(huán)境潔凈的實驗室均能飼養(yǎng)成活。目前開展雜交瘤技術的實驗室多選用純種BALB/C小鼠。2.免疫方案免疫方案應根據(jù)抗原...

2012 12-5

放射免疫分析及其在檢驗醫(yī)學中應用

放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)是以放射性核素為標記物的標記免疫分析法。于1960年由美國學者Yalow和Berson創(chuàng)立,并首先用于糖尿病患者血漿胰島素含量的測定。這是醫(yī)學和...

2012 12-1

熱穩(wěn)定腸毒素(ST)的快速檢測

(1)ELISA檢測STDe.Mai等(1983)以過氧化物酶標記抗體,用抗原競爭間接法檢測培養(yǎng)液中STl。定性檢測時底物用5—氨基水楊酸,定量時用鄰苯二胺。此法與乳鼠試驗的相符率為96.7%,無假陽...

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